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油乳剂灭活疫苗具有安全、稳定、易于保存、便于运输和免疫期长等优点，广泛应用于鸡传染病的控制。但油乳剂灭活疫苗吸收较慢，通常在注射免疫后1周内会引起局部组织轻微水肿，完全吸收需要3～4周。在实际生产中，由于免疫接种人员操作不规范或疫苗质量问题会导致疫苗注射部位出现局部组织坏死、增生等不良反应，严重时导致鸡只死亡。本文对郑州正德牧业禽病医院20172018两年内收集到的56例因注射油乳剂灭活疫苗引起不良反应病例剖检记录进行调查、数据分类和整理，分析不良反应产生的原因，并提出有效预防措施。
一、病例来源
对郑州正德牧业禽病医院2017-2018两年内临床上确诊为因注射油乳剂灭活疫苗出现不良反应就诊病例进行登记，统计注射疫苗种类、注射部位、注射方法、注射剂量、注射前疫苗是否预温、注射疫苗后出现反应的比例和死亡率等情况，并进行跟踪调查。
二、临床癥状
注射油乳剂灭活疫苗出现不良反应的鸡只，在注射疫苗7天后表现出精神沉郁、羽毛松乱、缩颈闭眼、食欲减退或废绝、排黄白色稀便等症状，病鸡出现渐进性消瘦。
颈部皮下注射后的不良反应主要表现为：鸡头面部、肉髯出现肿胀，眼眶周围和上额肿胀发硬，形成典型的“狮子头”，肿胀部位质地坚硬无热疼感。颈部出现大小不等的结节，质地稍坚硬、大小不一，小的如黄豆粒、大的如枣样。
注射部位在腿部时，主要症状为局部肿胀，运动障碍及不愿运动。运动时出现明显的跛行，严重时局部皮肤出现溃烂，流出黄色脓性分泌物。
注射部位在胸部肌肉时，不良反应主要表现为胸肌局部形成硬块状增生和坏死。
三、病理剖检变化
1. 局部病变
注射局部出现严重蜂窝织炎、局部组织增生和白细胞浸润、局部肌肉坏死和肿瘤样增生等病理变化。
颈部皮下注射不良反应，在颈部皮下疏松结缔组织中形成大小不等的结节，大的如枣样，外观呈肿瘤样结节，有结缔组织包膜，切开后有乳白色油状物流出，或混有灰黄色干酪样坏死;小结节如黄豆粒，在外层有薄膜包裹，内部为乳白色油状物或灰黄色干酪样坏死，在颈部皮下气管和食道周围有大量的结缔组织增生，压迫气管。头部和肉髯肿胀的病例，切开头部和肉髯皮肤，皮下有纤维素性增生，在增生物中有白色油状物。
腿部肌内注射不良反应，切开肿胀部位的皮肤，在局部肌肉组织中出现肌肉肿胀，皮下有灰黄色浆液浸润，切开肌肉呈灰白色熟肉状坏死，在肌间有灰黄色干酪样物和乳白色油状物（图1）。若油乳剂灭活疫苗注射过深，在坐骨神经和血管周围有白色油状物和白细胞浸润及周围组织的坏死;若油乳剂灭活疫苗注射过浅，在跗关节周围肿胀，剖开皮肤在皮下有黄色干酪样物和油状物。
胸部肌内注射不良反应和腿部肌内注射不良反应病理变化相似（图2）。
2.全身病变
剖检病死鸡，发现鸡只瘦弱、发育较差。肝脏肿大、出血，质脆易碎如烂泥，在腹腔内集有大量不凝固血液;脾脏肿大。
四、诊断
1.细菌分离培养
对出现疫苗不良反应死亡鸡进行病变局部和肝脏无菌采集病料，用普通营养琼脂做细菌分离培养。结果56例病例中54例为细菌阴性，2例有细菌混合感染。
2.组织切片检查
对瘤样增生组织做石蜡切片，HE染色进行显微镜观察，发现瘤样增生病变组织由大量大小不等的结节、大小不等的空泡、成纤维细胞和大量嗜伊红细胞组成。增生组织有五层结构，中心为均质红染的坏死物，坏死物周围是大量的核浓缩、核碎裂坏死细胞;再向外是一层较薄的上皮样细胞带（内有多核巨噬细胞，可见巨噬细胞吞噬油苗颗粒，而呈大小不等的圆形空泡状）;再向外为一层宽大的炎性水肿疏松区，其中细胞数量较少;最外层是成纤维细胞、淋巴细胞构成的类似包膜的组织。
3.同批次疫苗接种试验
将注射油乳剂灭活疫苗出现不良反应的剩余同批号疫苗，按原接种部位、方法，使用消毒注射器具、疫苗充分预温，按生产厂家提供的接种量接种于相近日龄的鸡只。每批接种5只健康的鸡只，注射后观察注射部位变化，观察期为25天。如果7～15天个别鸡只出现注射部位轻度肿胀，25天时用手触摸局部无瘤样肿块，剖检个别鸡仅见有小的白色油包，未见组织坏死及溃烂现象，无明显的组织增生和肉芽肿块，说明油乳剂灭活疫苗是由正规厂家生产的合格产品，可安全使用。
五、疫苗不良反应情况分析
1.过最注射疫苗
因过量注射油乳剂灭活疫苗而出现疫苗不良反应的有47例，占总病例数的84%。据统计结果可知，出现油乳剂灭活疫苗不良反应与过量注射疫苗有关。
2.疫苗病原类型
统计发现，细菌性油乳剂灭活疫苗不良反应大于病毒性灭活疫苗。细菌性灭活疫苗不良反应发生率为24%，病毒性灭活疫苗不良反应发生率为15%。细菌性灭活疫苗不良反应死亡率为4%，病毒性灭活疫苗不良反应死亡率为2%。
3.疫苗预温
根据56例油乳剂灭活疫苗出现不良反应的统计结果，有49例注射前未对油乳剂灭活疫苗进行充分预温。从4℃冰箱中取出后直接注射，其发病率为16%，死亡率为2%;预温不充分发病率为9%，死亡率为1%;而经充分预温发病率为5%，死亡率仅为0.8%。
六、预防措施
措施一：油乳剂灭活疫苗是将病原微生物用理化方法灭活、添加乳化免疫佐剂加工而来，此类疫苗具有安全、稳定、易于保存和运输、能够反复刺激机体产生抗体、抗体持续时间长等优点，在鸡的传染病防控中应用较多。但油乳剂灭活疫苗在使用中一定要按厂家提供的剂量、方法使用，若在生产中随意加大剂量，会导致疫苗中灭活剂、佐剂（白油、乳化剂）、未完全消除的尿囊蛋白超量，直接影响疫苗的正常吸收，引起注射部位出现水肿、肌肉坏死、瘤样增生及肝脏坏死出血甚至死亡。本次调查56例疫苗不良反应中有84%是因为注射油乳剂灭活苗过量引起，所以养殖户一定要按说明书中的剂量进行免疫，以减少不良反应的发生。
措施二：一般油乳剂灭活疫苗保存在温度为4～ 8℃冰箱内，在注射前应进行预温处理，防止在注射时冷应激引起白细胞浸润，局部冷刺激还会导致局部毛细血管收缩、形成局部肿块。本次调查中不预温或预温不充分而出现疫苗不良反应的占88%。因此使用油乳剂灭活疫苗时一定要进行充分预温，方法是：在免疫前的1～2天，将油乳剂灭活疫苗放入鸡舍预温，或使用前用38℃温水水浴，尽量使疫苗与鸡只体温相近，从而减少不良反应。
措施三：本次调查有12例是因注射细菌性油乳剂灭活疫苗引起的不良反应，发生率明显高于病毒性油乳剂灭活疫苗（细菌性油乳剂灭活疫苗一般发病率在10%～40%，严重时达56%;而病毒性油乳剂灭活疫苗发病率一般在5%～20%）。这可能是因为细菌性油乳剂灭活疫苗在灭活过程中只考虑到细菌本身的灭活，没有考虑到细菌产生的毒素灭活，注射后毒素刺激局部组织，从而加大了疫苗反应。生产中细菌性传染病预防要谨慎使用疫苗，做好综合性防控，使用时要确保产品合格，并严格按照说明书或在兽医指导下使用，少量鸡只试打后确认无不良反应再在大群中使用。
措施四：家禽体温较高，一般在注射疫苗时很难引起细菌感染，本次调查56例疫苗不良反应中细菌感染仅有2例，其中1例是该群鸡有葡萄球菌感染，另1例是使用注射用品未消毒和针头过粗引起。因此要高度重视针头选择（雏鸡用7号针头，成年鸡用9号针头），注射前对注射器、针头进行高温、高压消毒。
措施五：油乳剂灭活疫苗不良反应的发生与IV型变态反应有关，其中免疫佐剂、灭活剂和尿囊蛋白都是引起变态反应的抗原。因此，作为油乳剂灭活疫苗研发、生产厂家应进一步研发效果更佳的佐剂和灭活剂，加强油乳剂灭活疫苗安全性研究和生产管理，提供安全有效的疫苗，更好地服务于养殖企业。
（作者联系地址：河南牧业经济学院动物科技学院邮编：450046）
一、病例来源
对郑州正德牧业禽病医院2017-2018两年内临床上确诊为因注射油乳剂灭活疫苗出现不良反应就诊病例进行登记，统计注射疫苗种类、注射部位、注射方法、注射剂量、注射前疫苗是否预温、注射疫苗后出现反应的比例和死亡率等情况，并进行跟踪调查。
二、临床癥状
注射油乳剂灭活疫苗出现不良反应的鸡只，在注射疫苗7天后表现出精神沉郁、羽毛松乱、缩颈闭眼、食欲减退或废绝、排黄白色稀便等症状，病鸡出现渐进性消瘦。
颈部皮下注射后的不良反应主要表现为：鸡头面部、肉髯出现肿胀，眼眶周围和上额肿胀发硬，形成典型的“狮子头”，肿胀部位质地坚硬无热疼感。颈部出现大小不等的结节，质地稍坚硬、大小不一，小的如黄豆粒、大的如枣样。
注射部位在腿部时，主要症状为局部肿胀，运动障碍及不愿运动。运动时出现明显的跛行，严重时局部皮肤出现溃烂，流出黄色脓性分泌物。
注射部位在胸部肌肉时，不良反应主要表现为胸肌局部形成硬块状增生和坏死。
三、病理剖检变化
1. 局部病变
注射局部出现严重蜂窝织炎、局部组织增生和白细胞浸润、局部肌肉坏死和肿瘤样增生等病理变化。
颈部皮下注射不良反应，在颈部皮下疏松结缔组织中形成大小不等的结节，大的如枣样，外观呈肿瘤样结节，有结缔组织包膜，切开后有乳白色油状物流出，或混有灰黄色干酪样坏死;小结节如黄豆粒，在外层有薄膜包裹，内部为乳白色油状物或灰黄色干酪样坏死，在颈部皮下气管和食道周围有大量的结缔组织增生，压迫气管。头部和肉髯肿胀的病例，切开头部和肉髯皮肤，皮下有纤维素性增生，在增生物中有白色油状物。
腿部肌内注射不良反应，切开肿胀部位的皮肤，在局部肌肉组织中出现肌肉肿胀，皮下有灰黄色浆液浸润，切开肌肉呈灰白色熟肉状坏死，在肌间有灰黄色干酪样物和乳白色油状物（图1）。若油乳剂灭活疫苗注射过深，在坐骨神经和血管周围有白色油状物和白细胞浸润及周围组织的坏死;若油乳剂灭活疫苗注射过浅，在跗关节周围肿胀，剖开皮肤在皮下有黄色干酪样物和油状物。
胸部肌内注射不良反应和腿部肌内注射不良反应病理变化相似（图2）。
2.全身病变
剖检病死鸡，发现鸡只瘦弱、发育较差。肝脏肿大、出血，质脆易碎如烂泥，在腹腔内集有大量不凝固血液;脾脏肿大。
四、诊断
1.细菌分离培养
对出现疫苗不良反应死亡鸡进行病变局部和肝脏无菌采集病料，用普通营养琼脂做细菌分离培养。结果56例病例中54例为细菌阴性，2例有细菌混合感染。
2.组织切片检查
对瘤样增生组织做石蜡切片，HE染色进行显微镜观察，发现瘤样增生病变组织由大量大小不等的结节、大小不等的空泡、成纤维细胞和大量嗜伊红细胞组成。增生组织有五层结构，中心为均质红染的坏死物，坏死物周围是大量的核浓缩、核碎裂坏死细胞;再向外是一层较薄的上皮样细胞带（内有多核巨噬细胞，可见巨噬细胞吞噬油苗颗粒，而呈大小不等的圆形空泡状）;再向外为一层宽大的炎性水肿疏松区，其中细胞数量较少;最外层是成纤维细胞、淋巴细胞构成的类似包膜的组织。
3.同批次疫苗接种试验
将注射油乳剂灭活疫苗出现不良反应的剩余同批号疫苗，按原接种部位、方法，使用消毒注射器具、疫苗充分预温，按生产厂家提供的接种量接种于相近日龄的鸡只。每批接种5只健康的鸡只，注射后观察注射部位变化，观察期为25天。如果7～15天个别鸡只出现注射部位轻度肿胀，25天时用手触摸局部无瘤样肿块，剖检个别鸡仅见有小的白色油包，未见组织坏死及溃烂现象，无明显的组织增生和肉芽肿块，说明油乳剂灭活疫苗是由正规厂家生产的合格产品，可安全使用。
五、疫苗不良反应情况分析
1.过最注射疫苗
因过量注射油乳剂灭活疫苗而出现疫苗不良反应的有47例，占总病例数的84%。据统计结果可知，出现油乳剂灭活疫苗不良反应与过量注射疫苗有关。
2.疫苗病原类型
统计发现，细菌性油乳剂灭活疫苗不良反应大于病毒性灭活疫苗。细菌性灭活疫苗不良反应发生率为24%，病毒性灭活疫苗不良反应发生率为15%。细菌性灭活疫苗不良反应死亡率为4%，病毒性灭活疫苗不良反应死亡率为2%。
3.疫苗预温
根据56例油乳剂灭活疫苗出现不良反应的统计结果，有49例注射前未对油乳剂灭活疫苗进行充分预温。从4℃冰箱中取出后直接注射，其发病率为16%，死亡率为2%;预温不充分发病率为9%，死亡率为1%;而经充分预温发病率为5%，死亡率仅为0.8%。
六、预防措施
措施一：油乳剂灭活疫苗是将病原微生物用理化方法灭活、添加乳化免疫佐剂加工而来，此类疫苗具有安全、稳定、易于保存和运输、能够反复刺激机体产生抗体、抗体持续时间长等优点，在鸡的传染病防控中应用较多。但油乳剂灭活疫苗在使用中一定要按厂家提供的剂量、方法使用，若在生产中随意加大剂量，会导致疫苗中灭活剂、佐剂（白油、乳化剂）、未完全消除的尿囊蛋白超量，直接影响疫苗的正常吸收，引起注射部位出现水肿、肌肉坏死、瘤样增生及肝脏坏死出血甚至死亡。本次调查56例疫苗不良反应中有84%是因为注射油乳剂灭活苗过量引起，所以养殖户一定要按说明书中的剂量进行免疫，以减少不良反应的发生。
措施二：一般油乳剂灭活疫苗保存在温度为4～ 8℃冰箱内，在注射前应进行预温处理，防止在注射时冷应激引起白细胞浸润，局部冷刺激还会导致局部毛细血管收缩、形成局部肿块。本次调查中不预温或预温不充分而出现疫苗不良反应的占88%。因此使用油乳剂灭活疫苗时一定要进行充分预温，方法是：在免疫前的1～2天，将油乳剂灭活疫苗放入鸡舍预温，或使用前用38℃温水水浴，尽量使疫苗与鸡只体温相近，从而减少不良反应。
措施三：本次调查有12例是因注射细菌性油乳剂灭活疫苗引起的不良反应，发生率明显高于病毒性油乳剂灭活疫苗（细菌性油乳剂灭活疫苗一般发病率在10%～40%，严重时达56%;而病毒性油乳剂灭活疫苗发病率一般在5%～20%）。这可能是因为细菌性油乳剂灭活疫苗在灭活过程中只考虑到细菌本身的灭活，没有考虑到细菌产生的毒素灭活，注射后毒素刺激局部组织，从而加大了疫苗反应。生产中细菌性传染病预防要谨慎使用疫苗，做好综合性防控，使用时要确保产品合格，并严格按照说明书或在兽医指导下使用，少量鸡只试打后确认无不良反应再在大群中使用。
措施四：家禽体温较高，一般在注射疫苗时很难引起细菌感染，本次调查56例疫苗不良反应中细菌感染仅有2例，其中1例是该群鸡有葡萄球菌感染，另1例是使用注射用品未消毒和针头过粗引起。因此要高度重视针头选择（雏鸡用7号针头，成年鸡用9号针头），注射前对注射器、针头进行高温、高压消毒。
措施五：油乳剂灭活疫苗不良反应的发生与IV型变态反应有关，其中免疫佐剂、灭活剂和尿囊蛋白都是引起变态反应的抗原。因此，作为油乳剂灭活疫苗研发、生产厂家应进一步研发效果更佳的佐剂和灭活剂，加强油乳剂灭活疫苗安全性研究和生产管理，提供安全有效的疫苗，更好地服务于养殖企业。
（作者联系地址：河南牧业经济学院动物科技学院邮编：450046）