【摘 要】
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目的:探讨Wnt5a调控大鼠胰岛β细胞瘤细胞Cyclin D1表达的通路机制.方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤系细胞INS-1,以人/鼠重组Wnt5a蛋白处理细胞0.5、1、3、6、12 h,进行时间梯
【机 构】
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中山市人民医院分子诊断中心,广东 中山,528403中山市人民医院病理科,广东 中山,528403;
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目的:探讨Wnt5a调控大鼠胰岛β细胞瘤细胞Cyclin D1表达的通路机制.方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤系细胞INS-1,以人/鼠重组Wnt5a蛋白处理细胞0.5、1、3、6、12 h,进行时间梯度实验;根据处理因素分为溶剂对照组、kn-62处理组、重组Wnt5a蛋白刺激组和kn-62+重组Wnt5a蛋白刺激组.蛋白质印迹法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、全细胞β-catenin、Cyclin D1水平变化.结果:经Wnt5a刺激后,INS-1胞内CaMKⅡ磷酸化水平升高,全细胞β-catenin水平下降,Cyclin D1表达减少(P<0.05);kn-62可降低细胞内CaMKⅡ磷酸化水平,拮抗外源性Wnt5a对全细胞 β-catenin和Cylcin D1的下调效应(P<0.05).结论:Wnt5a可通过激活大鼠胰岛β细胞瘤细胞INS-1的CaMKⅡ通路,抑制依赖β-catenin的经典Wnt通路,最终下调细胞Cyclin D1表达.
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