【摘 要】
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目的 根据丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白酶4个多肽底物切点的氨基酸序列特异性,设计1个多位点的竞争性抑制多肽序列.方法 采用中心模板法PCR合成多肽基因;利用原核高效表达载
【机 构】
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山东理工大学生命科学学院,军事医学科学院基础医学研究所疫苗工程研究室
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目的 根据丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白酶4个多肽底物切点的氨基酸序列特异性,设计1个多位点的竞争性抑制多肽序列.方法 采用中心模板法PCR合成多肽基因;利用原核高效表达载体pBVIL1在大肠杆菌HB101中,表达目的多肽;提取包涵体,用离子交换层析纯化蛋白;在体外添加到蛋白酶和NS5A-B片段构建的反应系统中,用SDS-PAGE鉴定多肽对病毒蛋白酶的抑制活性.结果 正确合成了多肽基因,重组载体pBVIL1/IP在HB101中表达了目的多肽;纯化后,获得电泳纯多肽;体外初步测定证实,随多肽浓度增加,蛋白酶底物降解受到抑制.结论 原核表达的重组抑制多肽,体外对HCV蛋白酶活性具有抑制作用.
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