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【摘 要】 目的：选择一种高效、快速、经济的从山羊血液中提取基因组DNA的方法。方法：分别采用了常规酚-氯仿抽提法、简易酚-氯仿快速抽提法、V-gene Biotechnology Limited试剂盒和天为时代试剂盒提取DNA,并利用琼脂糖凝胶电泳技术和紫外分光光度计比较各方法提出DNA的浓度和纯度。利用PCR扩增技术检测DNA的实用性。结果：常规酚-氯仿抽提法和V-gene Biotechnology limited试剂盒提出的DNA质量较好，适合作PCR扩增的模板; 快速抽提法和天为时代试剂盒提出的DNA纯度不高。结论：常规酚-氯仿抽提法适合大量提取DNA。
【关键词】 山羊；血液；DNA提取
山羊能够适合内蒙古高原地区气候条件而延续至今,是内蒙古自治区畜牧业经济中不可缺少的畜种。随着分子生物学技术的飞速发展,基因分析在动物遗传特性研究的应用日益广泛。但作为基因分析的关键步骤即基因组DNA提取和纯化一直是耗时繁琐的过程[1-3]。为了进一步在分子生物学水平上研究山羊的遗传特性,本实验提取山羊血液中DNA并对其进行肌肉生长抑因子的基因片段的PCR扩增做了分析与讨论,希望能够为今后在这方面的研究提供一些参考。
1 材料及方法
1.1 样品
山羊血液(鲜血 、冻血)
1.2 方法
1.2.1 常规酚—氯仿抽提法
1.2.2 简易酚—氯仿抽提法
1.2.2.1 提取鲜血DNA：取山羊颈静脉血于1.5ml离心管中，8000rpm离心30s，血液分为两层；将上、下两层分别放入两支1.5ml离心管中标号；加入0.5mlPBS，12000rpm离心5min（取下层沉淀吹打均匀）弃上清，加入0.4mlSTE反复吹打使悬液散开；加入12ul蛋白酶K30ulSDS充分振荡混合均匀，55℃水浴2.5hr；后将离心管置于沸水中煮5min；迅速冰浴5min（至离心管中液体还未结冰）12000rpm离心5min；加入0.5mlP：C：I=25：24：1，12000rpm离心10min弃酚层；加Tris-饱和酚250ul充分混合，12000rpm离心10min；取上清转移加0.5ml异丙醇水平摇晃，有丝状沉淀析出；12000rpm离心5min弃上清，干燥离心机中离心10min；加100ul灭菌三蒸水溶解基因组DNA，60℃水浴1小时或4℃过夜。
1.2.2.2 提取冻血DNA：1.2ml血液8000rpm离心30s不分层；分装至两人1.5ml离心管各600ul；加0.5mlPBS，12000rpm离心5min。
1.2.3 用V-gene Biotechnology limited试剂盒提取山羊血液中DNA方法
1.2.4 用天为时代试剂盒提取山羊血液中的DNA的方法
1.3 引物序列上游引物（5’to 3’）： ctt cac caa cag cct ggt gtt tg (23bp) (Tm:62 %GC: 52.17)下游引物（5’to 3’）： ttt att agg aaa gat ggg tag gca ct (26bp) (Tm:58.8 %GC:38.46)
2 结果
2.1 紫外分光光度计测量DNA浓度及纯度表：
表1 样品浓度与纯度表
2.2 琼脂糖凝胶电泳图
图1常规酚-氯仿抽提法提出的DNA电泳图
图2 简易酚抽提法（鲜血）
图3 简易酚抽提法（冻血）
图4 V-gene试剂盒法
图5 天为时代试剂盒法
图6常规酚-氯仿抽提法提出的DNA作模板的PCR扩增电泳图 3 结论
通过实验证明了在这四种方法中，常规酚—氯仿抽提法提取DNA尽管耗时长，但能够做大量的、高纯度的样品，是提取DNA的首选方法并能够很好的做为 PCR扩增模板。而其它方法提取DNA的效果不好。
参考文献
[1]Parzer S, Mannhalter C. A repid method for the isolation of gemonic DNA from citrated whole blood[J]. Biochem J.1991,273:229-231.
[2]Marko MA, Chipperfied R, Birbiom HC. A procedure for the large-scale isolation of highly purified plasmid DNA using alkaline extraction and bind to glass powder[J]. Anal Biochem,1982,121:382-387.
[3]《分子克隆实验指南》第二版,[美]J.萨姆布鲁克，E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯.
【关键词】 山羊；血液；DNA提取
山羊能够适合内蒙古高原地区气候条件而延续至今,是内蒙古自治区畜牧业经济中不可缺少的畜种。随着分子生物学技术的飞速发展,基因分析在动物遗传特性研究的应用日益广泛。但作为基因分析的关键步骤即基因组DNA提取和纯化一直是耗时繁琐的过程[1-3]。为了进一步在分子生物学水平上研究山羊的遗传特性,本实验提取山羊血液中DNA并对其进行肌肉生长抑因子的基因片段的PCR扩增做了分析与讨论,希望能够为今后在这方面的研究提供一些参考。
1 材料及方法
1.1 样品
山羊血液(鲜血 、冻血)
1.2 方法
1.2.1 常规酚—氯仿抽提法
1.2.2 简易酚—氯仿抽提法
1.2.2.1 提取鲜血DNA：取山羊颈静脉血于1.5ml离心管中，8000rpm离心30s，血液分为两层；将上、下两层分别放入两支1.5ml离心管中标号；加入0.5mlPBS，12000rpm离心5min（取下层沉淀吹打均匀）弃上清，加入0.4mlSTE反复吹打使悬液散开；加入12ul蛋白酶K30ulSDS充分振荡混合均匀，55℃水浴2.5hr；后将离心管置于沸水中煮5min；迅速冰浴5min（至离心管中液体还未结冰）12000rpm离心5min；加入0.5mlP：C：I=25：24：1，12000rpm离心10min弃酚层；加Tris-饱和酚250ul充分混合，12000rpm离心10min；取上清转移加0.5ml异丙醇水平摇晃，有丝状沉淀析出；12000rpm离心5min弃上清，干燥离心机中离心10min；加100ul灭菌三蒸水溶解基因组DNA，60℃水浴1小时或4℃过夜。
1.2.2.2 提取冻血DNA：1.2ml血液8000rpm离心30s不分层；分装至两人1.5ml离心管各600ul；加0.5mlPBS，12000rpm离心5min。
1.2.3 用V-gene Biotechnology limited试剂盒提取山羊血液中DNA方法
1.2.4 用天为时代试剂盒提取山羊血液中的DNA的方法
1.3 引物序列上游引物（5’to 3’）： ctt cac caa cag cct ggt gtt tg (23bp) (Tm:62 %GC: 52.17)下游引物（5’to 3’）： ttt att agg aaa gat ggg tag gca ct (26bp) (Tm:58.8 %GC:38.46)
2 结果
2.1 紫外分光光度计测量DNA浓度及纯度表：
表1 样品浓度与纯度表
2.2 琼脂糖凝胶电泳图
图1常规酚-氯仿抽提法提出的DNA电泳图
图2 简易酚抽提法（鲜血）
图3 简易酚抽提法（冻血）
图4 V-gene试剂盒法
图5 天为时代试剂盒法
图6常规酚-氯仿抽提法提出的DNA作模板的PCR扩增电泳图 3 结论
通过实验证明了在这四种方法中，常规酚—氯仿抽提法提取DNA尽管耗时长，但能够做大量的、高纯度的样品，是提取DNA的首选方法并能够很好的做为 PCR扩增模板。而其它方法提取DNA的效果不好。
参考文献
[1]Parzer S, Mannhalter C. A repid method for the isolation of gemonic DNA from citrated whole blood[J]. Biochem J.1991,273:229-231.
[2]Marko MA, Chipperfied R, Birbiom HC. A procedure for the large-scale isolation of highly purified plasmid DNA using alkaline extraction and bind to glass powder[J]. Anal Biochem,1982,121:382-387.
[3]《分子克隆实验指南》第二版,[美]J.萨姆布鲁克，E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯.