【摘 要】
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目的探讨紫外线(UVB)反应中TNF-α在介导VEGF诱导表达中的作用。方法采用TNF-α特异性shRNA转染小鼠成纤维细胞(MEFs)并建立稳定细胞株;RT-PCR方法验证TNF-αshRNA的有效性;
【机 构】
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军事医学科学院基础医学研究所病理生理学研究室,中国药科大学新药筛选中心,
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目的探讨紫外线(UVB)反应中TNF-α在介导VEGF诱导表达中的作用。方法采用TNF-α特异性shRNA转染小鼠成纤维细胞(MEFs)并建立稳定细胞株;RT-PCR方法验证TNF-αshRNA的有效性;荧光素酶报道分析系统检测vegf基因启动子活性;ELISA方法检测VEGF的分泌表达水平。结果本课题组构建的TNF-αshRNA能够有效抑制UVB刺激作用下TNF-α的诱导表达;同样条件下,UVB诱导vegf基因启动子活性上调趋势被TNF-αshRNA显著抑制;同时VEGF的胞外分泌表达水平明显下降。结论 UVB反应中TNF-α可间接介导VEGF的诱导表达。
Objective To investigate the role of TNF-α in the induction of VEGF-induced expression in UVB reaction. Methods The murine fibroblasts (MEFs) were transfected with TNF-α-specific shRNA and stable cell lines were established. The effectiveness of TNF-α shRNA was verified by RT-PCR. The promoter activity of vegf gene was detected by luciferase reporter assay system. Methods The secretion of VEGF was detected. Results Under the same conditions, the up-regulation of the promoter activity of vegf gene by UVB was significantly inhibited by TNF-αshRNA, and the level of extracellular secretion of VEGF Significant decline. Conclusion TNF-α can indirectly induce the expression of VEGF in UVB reaction.
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