【摘 要】
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番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)是严重危害多种草本及木本植物的口岸检疫性有害生物,加强口岸检验检疫是防止其入侵我国的关键.本研究以制备的抗TBRV特异性单克
【机 构】
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浙江经贸职业技术学院应用工程系,杭州310018浙江大学生物技术研究所/国家水稻生物学重点实验室,杭州310058;上海海关动植物与食品检验检疫技术中心,上海200135;
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番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)是严重危害多种草本及木本植物的口岸检疫性有害生物,加强口岸检验检疫是防止其入侵我国的关键.本研究以制备的抗TBRV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)建立TBRV的血清学检测技术,旨在为该病毒的检测和口岸检验检疫提供技术支持.以提纯的TBRV粒子为免疫抗原,利用杂交瘤细胞技术制备4株能分泌抗TBRV单抗的杂交瘤细胞(10A8,21A8,21B8和8D3)及其单抗腹水.4株单抗腹水的间接酶联免疫吸附试验(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,indirect-ELISA)效价达到10-7.Western blot分析单抗特异性表明,4株单抗均与感染植物中的TBRV外壳蛋白亚基发生特异性免疫反应,而不与健康植物组织发生反应.利用制备的单抗建立检测TBRV的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA)2种血清学方法.建立的Dot-ELISA和Tissue print-ELISA均能特异性检测感病植物中的TBRV,而与感染烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)和番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的植物和健康植物均呈阴性反应.以4株单抗建立的Dot-ELISA血清学方法检测TBRV病叶粗提液的灵敏度分别为1:10240、1:10240、1:5120和1:5120.上述实验结果表明,基于制备的4株单抗所建立的Dot-ELISA和Tissue print-ELISA血清学方法对于TBRV检测具有高度特异性和灵敏性,可以准确、有效地用于口岸TBRV检验检疫和田间植物TBRV的检测诊断.
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