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目的
观察微小RNA(miRNA,miR)-494通过调节生存素(Survivin)对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。
方法miR-494体外模拟物(mimic)转染,构建miR-494上调表达模型,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法验证转染效果;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖率变化;流式细胞技术检测细胞凋亡率变化;细胞体外侵袭试验检测细胞侵袭能力变化;Real-time PCR法和Western blot实验分别检测Survivin mRNA和蛋白表达水平。
结果miR-494 mimic转染后,MG-63细胞中miR-494表达水平(4.38±0.53)较对照组(1.02±0.02)明显升高(t=6.312,P=0.003),miR-494 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组,流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率[(8.76±0.82)%]较对照组[(5.43±0.63)%]明显提高(t=3.199,P=0.032),体外侵袭实验证实mimic组每视野下平均细胞数[(60.40±11.28)个]明显少于NC组[(109.51±7.46)个,t=3.628,P=0.022],Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-494 mimic转染后,Survivin在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制。
结论miR-494表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,这些作用与下调Survivin表达有关。