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为优选双黄连注射液最佳灭菌条件,采用《中华人民共和国兽药典》2015版中灭菌法下湿热灭菌法中3种灭菌程序对双黄连注射液进行灭菌,运用高效液相色谱法、中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.0版本)对3批双黄连注射液的3种有效成分含量、指纹图谱相似度进行比较。结果表明,在湿热灭菌法下,双黄连注射液采用121℃×30 min灭菌程序灭菌效果最佳。