目的分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库。方法将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代(P3V1~P3V20),采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度。优化JEV静置培养条件(维持液p H值、培养温度、MOI)及接种方式(单层接种法、混合接种法),并进行培养规模的放大。采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析。建立JEV毒种库,并进行全面检定。结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lg LD50/ml。最适培养条件为:病毒维持液p H值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;最佳接种方式为:单层接种法。在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平。P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100%,传代稳定性良好。建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求。结论已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础。