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β-半乳糖苷酶被广泛用于医药、临床、化学等领域,其酶活性的测定缺少标准方法。采用ONPG比色测定法测酶活性,通过单因素试验研究了影响酶活性的缓冲液pH、底物溶液浓度、反应温度、酶与底物反应比、反应时间等因素,采用mintab15响应面分析法,确认显著影响因子。采用正交实验进一步优化检测条件,确定出最佳酶活性测定条件:反应试剂pH为6.3,反应时间15分钟,反应温度为45℃。该检测方法稳定、准确、高效,可作为β-半乳糖苷酶活性检测方法推广使用。