【摘 要】
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目的探索趋化素样因子1 (chemokine-like factor1,CKLF1)对强直性脊柱炎(ankylosingspondyliti,AS)髋关节滑膜成纤维细胞增殖和成骨转化的影响。方法对照组和AS髋关节滑膜组
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81672183);国家重点研发计划项目(2016YFC1101800,2017YFC0108003);北京市科委重大项目(D171100003217002,Z171100002717094);北京市自然科学基金面上项目(7182172);北京大学人民医院院内发展基金资助项目(RDY2018-04,RDY2016-15);2015年国际骨关节炎研究协会(OARSI)访
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目的探索趋化素样因子1 (chemokine-like factor1,CKLF1)对强直性脊柱炎(ankylosingspondyliti,AS)髋关节滑膜成纤维细胞增殖和成骨转化的影响。方法对照组和AS髋关节滑膜组织分别取自我科4例股骨颈骨折和3例重度AS拟行髋关节置换患者。滑膜组织经常规消化后获得单个细胞,并在倒置相差显微镜下进行观察和抗vimentin免疫荧光染色(immunofluorescence,IFC)检测。对上述髋关节滑膜组织及成纤维细胞分别行原位和体外培养,重组腺相关病毒(rAAV)-lacZ、rAAV-hCKLF1转染后21天收集标本。分别采用ELISA、IFC和荧光定量RT-PCR检测细胞增殖、致炎性细胞因子分泌、成骨分化的关键靶基因CKLF1及CCR4的表达。结果第3代正常和AS细胞抗vimentin IFC检测均为阳性,表明分离培养的细胞为成纤维细胞。rAAV-hCKLF1转染后21天,HE染色并计数单位面积下的细胞数、水溶性四氮唑法(WST-1)检测细胞增殖能力和Hoechst 33258检测细胞DNA含量均显示,CKLF1转染促进细胞增殖,且与无病毒转染组、lacZ组相比,差异有统计学意义(P=0.0000,P=0.0260,P=0.0020);正常和AS髋关节滑膜组织及成纤维细胞分泌的致炎性细胞因子(IL-6和TNF-α),均明显升高,且与无病毒转染组、lacZ组相比,差异有统计学意义(P=0.0060、P=0.0020);CKLF1尚能促进AS成纤维细胞表达特异性骨细胞外基质蛋白(OCN和OPN)表达;荧光定量RT-PCR与上述检测结果一致。结论过表达CKLF1促进AS髋关节滑膜成纤维细胞增殖和致炎性细胞因子分泌,增强成骨转化相关靶基因的转录,CKLF1可能在AS关节病理性骨化过程中发挥重要作用。
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