【摘 要】
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目的:建立反相液相色谱-串联质谱法(reversed phase liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,RPLC-MS/MS)筛选牙鲆鱼(Paralichthys olivaceus)中潜在
【机 构】
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大连海洋大学食品科学与工程学院,辽宁省水产品分析检验及加工技术科技服务中心,大连 116023
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目的:建立反相液相色谱-串联质谱法(reversed phase liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,RPLC-MS/MS)筛选牙鲆鱼(Paralichthys olivaceus)中潜在过敏原.方法:采用RPLC-MS/MS技术对牙鲆鱼的蛋白质样品进行蛋白质组学分析.再将牙鲆鱼蛋白质样品在体外模拟胃液中消化,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳观察不同酶解时间下鱼蛋白的酶解情况,将耐酶解的蛋白通过胶内酶解处理后采用RPLC-MS/MS法进行分析.最后将鉴定到的蛋白质与已知过敏原进行序列同源性分析.结果:在SDS-PAGE中酶解时间为3h时位于40 kDa处的条带仍清晰可见,此处的蛋白为耐酶解的蛋白质,经胶内酶解后共鉴定到5种蛋白质.与已知过敏原蛋白进行蛋白序列同源性分析,牙鲆鱼的原肌球蛋白alpha-1与已知过敏原Ore m 4的序列相似度较高.2种蛋白质的一致性和相似性分别为96.5％和97.9％.甘油醛-3-磷酸脱氢酶与已知过敏原Tri a 34序列对比一致性和相似性分别为72％和83％.肌酸激酶1与已知过敏原Pen m 2序列对比的一致性和相似性分别为42％和63％,2组序列相似度大于35％,说明也具有相似性.结论:耐胃蛋白酶酶解的大部分蛋白质是潜在的过敏原,其序列与其他物种已知的蛋白过敏原高度相似.该方法可作为筛选食物中潜在过敏原的一种新方法.
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