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目的为获得持续高表达VEGF165的大鼠毛囊干细胞(rat hair follicle stem cells,rHFSCs),观察慢病毒载体介导VEGF165基因对rHFSCs的转染及其表达情况。方法切取1周龄SD大鼠触须部皮肤,Dispase酶和Ⅳ型胶原酶混合消化,显微镜下分离毛囊隆突部,组织块培养rHFSCs;经Ⅳ型胶原差速贴壁纯化后,分别取不同代次rHFSCs绘制细胞生长曲线;联合应用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测相关基因鉴定细胞。钙转法包装pLV-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-VEGF165-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)(实验组)和pLV-IRES-EGFP空载体(对照组)慢病毒,用两组慢病毒转染rHFSCs。倒置荧光显微镜下观察实验组绿色荧光表达情况,RT-PCR和Western blot法分别检测VEGF165 mRNA和蛋白表达情况。结果分离、培养、纯化的rHFSCs呈典型"铺路石"状,贴壁较牢,克隆形成能力强;纯化后细胞培养1~2 d处于生长潜伏期,5~6 d处于对数生长期;细胞免疫荧光染色可见毛囊干细胞标志物角蛋白15(cytokeratin 15,CK15)、整合素α6和整合素β1表达呈阳性;RT-qPCR检测可见干细胞标志物CK15、CK19、整合素α6和整合素β1表达量高,而表皮干细胞标志物CD34和角质形成细胞标志物CK10表达量均较低。倒置荧光显微镜观察示,实验组慢病毒介导VEGF165基因转染14 d后转染效率可达85.76%±1.91%;RT-PCR和Western blot检测示,实验组VEGF165 mRNA和蛋白表达均呈阳性,对照组均呈阴性。结论经显微镜联合组织块分离培养、Ⅳ型胶原差速贴壁筛选后,可得到高纯度rHFSCs,细胞增殖能力强。慢病毒介导的VEGF165基因修饰方法可成功转染并得到高表达VEGF165 mRNA和蛋白的rHFSCs,可为组织工程构建人工毛囊、血管及皮肤等提供良好的种子细胞。