研究NANOG/乳腺癌缺失基因1(DBC1)通路对胃癌细胞生物学行为的影响。
方法选取2014年5月至2015年5月接受胃癌切除术的25例患者。利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测NANOG和DBC1在人畸胎瘤细胞N-tera、胃癌SGC-7901、HGC-27、MKN-45、MGC803、NCI-N87、BGC823细胞株、正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌组织中的表达。通过MTT实验、流式细胞术、平板克隆实验检测干扰NANOG-1组、干扰NANOG-2组、干扰对照组和干扰DBC1组MKN-45细胞的增殖、凋亡与集落形成能力。取干扰NANOG组、干扰对照组、干扰DBC1组和干扰DBC1＋NANOG组MKN-45细胞株，行PCR实验以验证两种基因的表达影响，进一步验证下调DBC1对细胞生物学行为的影响。基因芯片筛查干扰后的基因表达谱差异并进行生物信息学分析。双荧光素酶报告基因系统检测NANOG调控DBC1的作用机制。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。
结果NANOG和NANOG mRNA在N-tera细胞株中高表达，分别为1.02±0.08和0.95±0.03，在胃癌SGC-7901、HGC-27、MKN-45、NCI-N87细胞株中的表达分别为0.67±0.03和0.64±0.04，0.58±0.02和0.28±0.02，0.83±0.03和1.04±0.05，0.61±0.02和0.64±0.08，正常胃黏膜上皮细胞GES-1中未见表达，其在胃癌细胞株MKN-45中表达最高(F＝21.51、85.53，P均<0.01)。DBC1在HGC-27、MGC803、NCI-N87、SGC-7901、BGC823、MKN-45细胞株中的表达分别为0.37±0.02、0.33±0.02、0.42±0.01、0.58±0.04、0.33±0.05、0.87±0.02，正常胃黏膜上皮细胞GES-1中均未见NANOG、NANOG mRNA和DBC1表达。24.0%(6/25)的患者胃癌组织中检测到NANOG mRNA和DBC1表达。与干扰对照组比较，干扰NANOG-1组、干扰NANOG-2组的细胞凋亡率增加[(2.24±0.17)%比(6.03±0.24)%、(6.95±0.38)%]，差异有统计学意义(F＝81.18，P<0.01)。与干扰对照组比较，干扰NANOG-1组、干扰NANOG-2组细胞集落形成能力明显下降(172.03±6.35比74.32±5.32、53.08±3.82)，差异有统计学意义(F＝177.61，P<0.01)。PCR验证实验显示，与干扰对照组比较，干扰NANOG组细胞中NANOG mRNA和DBC1 mRNA水平均较低(1.04±0.05比0.54±0.03和1.08±0.08比0.42±0.03)，干扰DBC1组DBC1 mRNA水平较低(1.08±0.08比0.50±0.04)，差异均有统计学意义(t＝9.15、7.37、6.06，P均<0.01)；干扰DBC1＋NANOG组NANOG mRNA水平较高(1.04±0.05比3.01±0.08)，但DBC1 mRNA水平较低(1.08±0.08比0.71±0.06)，差异均有统计学意义(t＝－20.22、3.74，P均<0.05)；干扰DBC1＋NANOG组DBC1 mRNA水平高于干扰DBC1组(0.71±0.06比0.50±0.04)，差异有统计学意义(t＝4.00，P<0.05)。生物信息学分析DBC1基因启动子区域有NANOG蛋白质的可能结合位点。双荧光素酶报告系统显示，NANOG蛋白质对DBC1基因启动子区存在转录激活作用。
结论NANOG、DBC1在多种胃癌细胞中高表达，NANOG可通过调控DBC1的表达影响MKN-45细胞的增殖、凋亡、集落形成能力，NANOG/DBC1通路有望成为胃癌治疗的新靶点。