【摘 要】
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广式酱油发酵周期长、微生物种群多样、代谢物复杂，缺乏微生物蛋白组学分析的样本制备方法。本文通过比较改良的TCA浓缩法和超滤法两种蛋白纯化方法，利用SDS-PAGE凝胶电泳和LTQ Orbitrap Velos Pro ETD质谱检测酱油微生物宏蛋白组样本制备效果。实验结果表明：TCA浓缩法制备的蛋白样品，其SDS-PAGE凝胶图谱有26个清晰条带，比超滤法多13个；两种法所制备的蛋白经胰蛋白酶酶切
【机 构】
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中炬高新技术实业(集团)股份有限公司
【基金项目】
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中山市科学技术局项目（CXTD2020006）；
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广式酱油发酵周期长、微生物种群多样、代谢物复杂，缺乏微生物蛋白组学分析的样本制备方法。本文通过比较改良的TCA浓缩法和超滤法两种蛋白纯化方法，利用SDS-PAGE凝胶电泳和LTQ Orbitrap Velos Pro ETD质谱检测酱油微生物宏蛋白组样本制备效果。实验结果表明：TCA浓缩法制备的蛋白样品，其SDS-PAGE凝胶图谱有26个清晰条带，比超滤法多13个；两种法所制备的蛋白经胰蛋白酶酶切后的质谱图可分别鉴定到的2 495和1 682个肽段，说明TCA浓缩法制备的蛋白样品酶切更充分；不同发酵时期（0、60、120 d）的酱油经TCA浓缩法制备的蛋白样品，烷基化、酶切后，通过LTQ Orbitrap Velos Pro ETD质谱检测和Proteome Discoverer 2.5软件分析，可分别鉴定到1 035、1 104、1 046种蛋白质。通过TCA浓缩法制备蛋白组分析样本，操作简便，实验速度快，蛋白质鉴定率高，适用于广式酱油微生物的蛋白质组学的检测分析，为利用蛋白组学分析广式酱油的微生物发酵分子机制打下了一定的基础。
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