【摘 要】
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目的应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体。方法将PTENcDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细
【机 构】
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南方医科大学南方医院呼吸内科,南方医科大学南方医院心内科实验室,南方医科大学南方医院肾移植科
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目的应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体。方法将PTENcDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组,经Pac-Ⅰ线性化后,重组子通过脂质体2000介导转染HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒,并测定其滴度,通过荧光显微镜能观察HEK293细胞内绿色荧光的表达;PCR检测腺病毒载体PTEN mRNA的表达,Western blotting检测PTEN蛋白在气道平滑肌细
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