【摘 要】
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目的构建含有人组织因子(h TF)基因的毕赤酵母高效表达系统,实现胞外高效分泌表达。方法全基因合成h TF胞外区序列,PCR扩增该基因片段,经Xho I和Xba I双酶切后,和表达载体p G
【机 构】
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山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室/山东省多糖类药物工程实验室/多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室,山东福瑞达医药集团公司
【基金项目】
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国家高技术研究发展(863)计划(2014AA093603);山东省科技发展计划,(2014GSF121043);山东省自主创新成果转化专项(2014GGZH1306);山东省重点研发计划(2015GSF121003);济南市重大专项(201403009);山东省科技重大专项(重大关键技术)(2015ZDJS04002)
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目的构建含有人组织因子(h TF)基因的毕赤酵母高效表达系统,实现胞外高效分泌表达。方法全基因合成h TF胞外区序列,PCR扩增该基因片段,经Xho I和Xba I双酶切后,和表达载体p GAPZa A相连,并电转化毕赤酵母SMD1168H。在YPD培养基中进行表达,取培养基上清进行SDS-PAGE检测,并利用Western进行确证,通过BCA法检测胞外蛋白表达量。结果在毕赤酵母中成功表达人组织因子,通过Western确证目的蛋白分子量大小正确,BCA法检测摇瓶表达胞外总蛋白达1 g/L,Bandscan软件分析目的蛋白占胞外总蛋白80%以上。结论本研究实现了截短型人组织因子在毕赤酵母中的高效分泌表达,获得了具有与完整因子相同凝血活性的截短型组织因子。
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