【摘 要】
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目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过PTEN条件性基因敲除小鼠(Ptenflox/flox小鼠),与软骨细胞特异表达Cre重组酶的
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划项目(2005CB522604);国家自然基金杰出青年基金资助项目(30425023);国家自然科学基金重点资助项目(30530410)
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目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过PTEN条件性基因敲除小鼠(Ptenflox/flox小鼠),与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠(Col2αCre)交配,获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠(Col2αCre:Ptenflox/flox);同时,利用Ptenflox/flox小鼠与FGFR3增强型点突变小鼠(Fgfr3G369C/+小鼠,即ACH小鼠)交配,子代杂合子小鼠(Ptenflox/+:ACH)之间再交配,获得Ptenflox/flox:ACH小鼠;通过Col2αCre:Ptenflox/flox和Ptenflox/flox:ACH交配即可获得在软骨细胞中特异性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠(Col2αCre:Ptenflox/flox:ACH)。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率,通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析。结果获得了在软骨细胞中敲除PTEN的FGFR3点突变小鼠,免疫荧光染色证实Col2αCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低。初步的表型分析显示:Col2αCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠身长、尾长均较Ptenflox/flox:ACH小鼠长(P<0.05,n=5)。Col2αCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠表型,较Ptenflox/flox:ACH小鼠的侏儒表型有所缓解。结论采用基于Cre/LoxP系统的条件性基因敲除策略,获得了在软骨细胞中敲除PTEN基因的FGFR3增强型突变小鼠,表型分析初步显示,软骨细胞特异性敲除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小鼠侏儒表型。该小鼠的获得,为研究PI3K/AKT信号通路在FGFR3突变介导的软骨生长抑制中的作用提供了实验动物平台。
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