【摘 要】
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目的 确定中性内肽酶(NEP)高表达对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制.方法 利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系,逆转录-聚合酶链
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目的 确定中性内肽酶(NEP)高表达对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制.方法 利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹法(Western blot法)检测基因在细胞中的表达.利用Aβ25-35诱导PC12细胞,CellTiter96(R) AQueous单溶液检测系统(MTS)检测细胞存活率;分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量、活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase-3表达量的变化.结果 在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中,NEP高表达可明显提高细胞存活率,降低培养基中LDH含量和ROS生成量;提高细胞ATP释放量;抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活,与正常PC12细胞相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响.结论 NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤,抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活,从而提高Aβ25-35诱导的神经细胞的存活率.
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