【摘 要】
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目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中，通过单丹磺酰戊二胺（MDC）染色和透射电镜观察黄芪甲苷（AS-IV）对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中，建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法（IF）以及蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测各组别中自噬和凋亡情况的变化以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键蛋
【机 构】
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湖南中医药大学中医药防治眼耳鼻喉疾病湖南省重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81874408）； 湖南省卫计委科研项目（202207015049）； 湖南省教育厅科研项目（21C0234）； 2022年度湖南中医药大学中医学开放基金项目（2022ZYX22）； 湖南省自然科学基金项目（2020JJ54
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目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中，通过单丹磺酰戊二胺（MDC）染色和透射电镜观察黄芪甲苷（AS-IV）对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中，建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法（IF）以及蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测各组别中自噬和凋亡情况的变化以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键蛋白的表达变化。结果：与空白组比较，不同剂量的AS-IV(5、10、20μmol·L-1)作用于5-8F细胞后，各AS-IV组的自噬荧光强度均明显增强，其中，干预24h，各AS-IV组的自噬荧光表达最强，10μmol·L-1AS-IV组的荧光表达最明显；与空白组比较，透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素（RAPA）诱导5-8F细胞内出现较多自噬体；3-甲基腺嘌呤（3-MA）作为自噬抑制剂，透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成；AS-IV10μmol·L-1组细胞内结构和细胞膜完整、清楚，可见自噬体形成；与空白组比较，AS-IV低、中、高剂量组的肿瘤体积明显受到抑制，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；与空白组比较，AS-IV低、中、高剂量组中的微管相关蛋白l轻链3-Ⅱ/微管相关蛋白l轻链3-Ⅰ（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）和活化半胱氨酸蛋白酶-3（CleavedCaspase-3）荧光信号明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；与空白组比较，AS-IV低、中、高剂量组中的自噬相关蛋白酵母ATG6 同源物（Beclin-1）、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、多腺苷二磷酸多聚酶（Cleaved PARP）的表达量均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），而自噬相关蛋白泛素结合蛋白（p62）的表达明显下调，差异统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；与空白组比较，各AS-IV组中的磷酸化磷脂酰肌醇 3-激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白表达量明显降低，差异统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论：黄芪甲苷可诱导鼻咽癌细胞发生自噬和凋亡，其机制可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路。
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