【摘 要】
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目的：探索高浓度肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导的炎症环境下线粒体自噬与大鼠骨髓间充质干细胞（Rat Bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs）成骨分化能力的相关性。方法：利用100ng/ml TNF-α构建体外炎症微环境。探讨在炎症微环境下，线粒体自噬与成骨分化的相关性，将实验分为T组（TNF-α 100
【机 构】
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解放军医学院解放军总医院第一医学中心口腔科
【基金项目】
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国家自然科学基金（项目编号：8207034207）；
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目的：探索高浓度肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导的炎症环境下线粒体自噬与大鼠骨髓间充质干细胞（Rat Bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs）成骨分化能力的相关性。方法：利用100ng/ml TNF-α构建体外炎症微环境。探讨在炎症微环境下，线粒体自噬与成骨分化的相关性，将实验分为T组（TNF-α 100ng/ml组）、T+促进剂组（TNF-α 100ng/ml+雷帕霉素（Rapamycin）组）和T+抑制剂组（TNF-α 100ng/ml+3-甲基腺嘌呤（3-MA）组）。使用免疫荧光观察线粒体自噬变化，通过CCK-8，碱性磷酸酶（alkaline ph osph atase, ALP）活性测定、茜素红染色法检测线粒体自噬的变化对细胞增殖与成骨分化的影响，利用RT-PCR、Western Blot分别检测成骨与线粒体自噬相关基因和蛋白的表达情况，以期探索炎症环境下线粒体自噬对成骨分化能力的影响。结果：TNF-α 100ng/ml成功构建体外炎症微环境。Mito-tracker与LC3共定位PCC结果显示：T+促进剂组优于T+抑制剂组（P<0.05）。CCK-8、ALP活性测定与茜素红染色结果显示：与T组相比，T+促进剂组rBMSCs增殖能力、ALP活性、钙结节矿化程度增强，而T+抑制剂组rBMSCs增殖能力、ALP活性、钙结节矿化程度减弱（P<0.05）。RT-PCR和Western Blot结果显示，与T组相比，T+抑制剂组成骨相关蛋白与基因ALP和OPN表达量显著下降，线粒体自噬相关蛋白LC3II/LC3I、PINK1、Parkin显著下降，P62/SQSTM1显著升高（P<0.05）。T+促进剂组与T组相比，成骨相关蛋白与基因ALP和OPN表达显著上升，线粒体自噬相关蛋白LC3II/LC3I、PINK1、Parkin表达显著上升，P62/SQSTM1表达显著下降（P<0.05）。结论：在TNF-α 100ng/ml构建的体外炎症微环境下，随着rBMSCs线粒体自噬能力下降，成骨分化能力受到抑制。
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