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目的 通过5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干扰人子宫内膜样癌(Endometrial carcinoma,EC)JEC细胞(中分化)前后,检测p57kip2基因启动子区甲基化状态及其蛋白表达情况、细胞生长和形态改变,探讨p57 kip2对子宫内膜癌增殖、分化的影响.方法 Ⅰ.Sanger测序方法检测JEC细胞中p57 kip2基因变异情况.Ⅱ.含不同浓度5-Aza-CdR(对照组、5、7.5、10、12.5、15μmol/L)的培养基干扰JEC细胞24 h,亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)法检测各组p57kip2基因启动子区甲基化率分别为88.8％、88.1％、83.8％、85.8％、76.2％、83.1％,选择甲基化率下降明显的12.5μmol/L和15μmol/L两个浓度体外培养JEC细胞作为实验组.(1)培养24、48、72 h,四甲基亚唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况;(2)培养24、72 h,West blot法检测P57kip2蛋白表达情况;(3)培养72 h,光镜、电镜观察细胞形态结构变化.结果 Ⅰ.Sanger测序结果:JEC细胞中未检测出p57 kip2基因外显子突变.Ⅱ.p57 kip2基因启动子区甲基化水平:JEC细胞中p57kip2基因启动子区呈高甲基化状态,经5-Aza-CdR干扰24 h后,12.5μmol/L组(76.2％)、15μmol/L组(83.1％)的总体甲基化率较对照组(88.8％)下降明显.(1)MTT结果:和对照组比较,12.5μmol/L组在24、48 h细胞生长被明显抑制(P<0.05);15μmol/L组在48 h被明显抑制(P<0.05);12.5μmol/L组在24、48 h细胞生长均明显低于15μmol/L组(P<0.05);随着时间延长,两实验组的细胞生长抑制状态逐渐逆转,但仅15μmol/L组在72 h变化明显(P<0.05).(2)West blot结果:和对照组比较,12.5μmol/L组中P57kip2蛋白的表达在各时间段均上调,以24 h上调明显(P<0.05),15μmol/L组无明显上调(P>0.05);随着作用时间的延长,P57kip2蛋白在两实验组中表达的上调趋势被削弱,以12.5μmol/L组更明显(P<0.05).(3)形态改变:和对照组比较,两实验组细胞密度略微有减少,细胞表面微绒毛均更加丰富,细胞内可见较多分泌泡和自噬现象.结论 在JEC细胞中,p57 kip2基因外显子无突变,5-Aza-CdR能下调p57 kip2基因启动子区的总体甲基化率,从而上调P57kip2蛋白表达,使细胞生长受抑制,其中12.5μmol/L组的生长抑制作用比15μmol/L组更明显,可能还促进JEC细胞往更好的分化方向转变;随着时间的延长,没有持续追加5-Aza-CdR,p57kip2启动子区逐渐恢复甲基化,导致P57 kip2蛋白表达上调的趋势再次被减弱.