【摘 要】
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目的：探讨特异性阻断黏着斑激酶(FAK)表达对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞(HSC-T6)黏附与迁移的影响.
方法：构建靶向FAK的RNA干扰重组体,在阳离子聚合物介导下转染大鼠肝星
【机 构】
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050000,石家庄,河北医科大学第二医院消化科,河北省消化病重点实验室,河北省消化病研究所
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目的：探讨特异性阻断黏着斑激酶(FAK)表达对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞(HSC-T6)黏附与迁移的影响.
方法：构建靶向FAK的RNA干扰重组体,在阳离子聚合物介导下转染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,筛选出可高效抑制FAK表达的重组质粒；荧光实时定量PCR和Western blot检测FAK基因敲除效果；甲苯胺蓝染色法检测细胞黏附,划痕修复实验和改良的Boyden双腔系统检测细胞迁移.多组间均数差异性比较采用单因素方差分析.
结果：成功构建并筛选出可高效抑制FAK的质粒表达载体.质粒转染后,FAK mRNA和蛋白表达分别下降了76.82[％]和72.53[％],同时,p-FAK(Tyr397)蛋白表达下降了62.71[％] FAK表达下调可明显抑制HSC-T6细胞黏附,抑制率约58.69[％]；FAK基因沉默可显著抑制纤维连接蛋白诱导的HSC迁移,使细胞迁移距离降低了58.27[％],跨膜迁移细胞数减少了83.70[％].
结论：RNA干扰技术可选择性下调HSC中FAK的表达,并可显著抑制HSC-T6的黏附和迁移.
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