【摘 要】
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【目的】通过研究（R）-专一性羰基还原酶和甲酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的共表达,解决较高底物浓度下不对称转化反应的辅酶限制性问题。【方法】分别以近平滑假丝酵母（Candida par
【机 构】
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江南大学生物工程学院教育部工业生物技术重点实验室
【基金项目】
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国家“973项目”(2003CB716008);国家“863计划”(2007AA02Z200，2006AA020104);国家自然基金项目(20776060);新世纪优秀人才支持计划(NCET-04-0498)~~
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【目的】通过研究（R）-专一性羰基还原酶和甲酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的共表达,解决较高底物浓度下不对称转化反应的辅酶限制性问题。【方法】分别以近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis CCTCC M203011）和博伊丁假丝酵母（Candida boidinii）基因组为模板,采用PCR方法扩增得到（R）-专一性羰基还原酶基因（rcr）和甲酸脱氢酶基因（fdh）,克隆到共表达载体pETDuetTM-1中进行表达。共表达质粒pETDuet-rcr-fdh转化稀有密码子优化型菌株E.coli Rosetta,获得重组菌E.coli Rosetta/pETDuet-rcr-fdh。【结果】在30℃条件下,经1 mmol/L IPTG诱导表达8 h后,SDS-PAGE结果表明（R）-专一性羰基还原酶和甲酸脱氢酶均有明显的表达,其相对分子质量分别为37 kDa和40 kDa。以高浓度（6 g/L）2-羟基苯乙酮为底物时,0.1 g重组菌细胞催化产生（R）-苯基乙二醇,产物光学纯度为100%e.e.,产率为85.9%。与无甲酸脱氢酶参与辅酶再生循环的重组菌E.coli Rosetta/pETDuet-rcr相比,产物光学纯度和产率分别提高了1.3和2.7倍。【讨论】该重组菌的构建为基因工程法生物合成（R）-苯基乙二醇的工业应用奠定了基础。
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