【摘 要】
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目的:了解贵州关岭余甘子内生真菌的多样性,探究余甘子果汁抗氧化及抑菌功能的相关性.方法:取贵州省关岭县10月份野生健康成熟新鲜的余甘子果实,采用研磨法获得余甘子果汁;采
【机 构】
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贵州医科大学 基础医学院 微生物学教研室,贵州 贵阳 550025贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地 &贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室,贵州 贵阳 550025;贵州省微生物与人类健康关系
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目的:了解贵州关岭余甘子内生真菌的多样性,探究余甘子果汁抗氧化及抑菌功能的相关性.方法:取贵州省关岭县10月份野生健康成熟新鲜的余甘子果实,采用研磨法获得余甘子果汁;采用组织分离法对果实进行内生真菌分离,按照菌丝尖端切割法接种至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基纯化3次并保存;取本校真菌室提供的标准菌株,采用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒提取分离获得的真菌菌株DNA、并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其内转录间隔区(ITS)基因序列后测序,采用分子系统学方法对分离获得的真菌菌株进行鉴定、归类及多样性评估,采用邻接法(N-J)基于ITS序列构建系统发育树;摇床培养提取内生菌发酵液,采用纸片扩散法对发酵液和余甘子果汁进行抑菌活性测试,并绘制维生素C(Vc)标准曲线测定菌株的总抗氧化能力.结果:余甘子果实中分离出内生真菌43株,其中青霉属19株、横梗霉属9株、间座壳属11株、叶点霉属1株、葡萄座腔菌属3株,青霉属为优势属,其中Penicillium chrysogenum分离出15株,数量最多,为优势菌种;ITS序列比对结果显示,分离株43株、标准株5株,构建N-J系统发育树;43株内生真菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及白念珠菌均无抑制效果,余甘子果汁对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较明显效果,但对白念珠菌无抑制效果;Vc标准曲线回归方程为y^=0.8095 x-0.0828,R2=0.9937,经样品测试,43株菌的发酵液总抗氧化能力明显高于空白培养基,相对于Vc的抗氧化能力范围104.76～156.64 mg/L.结论:分离出的余甘子内生真菌中,青霉属为优势菌属,P.chrysogenum为优势菌种;2株内生真菌具有较强的抗氧化作用,分离出的43株内生真菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及白色念珠菌均无明显抑制效果.
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