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目的
构建一种具有靶向性的非病毒基因治疗载体高尔基体蛋白73(GP73)-脂质体lipoplexes,并检测其对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞HL-7702的转染效率和凋亡的影响。
方法以水溶性碳二亚胺为交联剂将GP73与lipoplexes偶联。用GP73-lipoplexes运载标记有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)荧光报告基因的PGenesil-l质粒转染肝癌细胞组HepG2和肝正常细胞组HL-7702,通过荧光显微镜观察被转染细胞GFP的表达情况,流式细胞术检测转染效率。并用GP73-lipoplexes运载含治疗基因HSVtk的质粒PBI-SUR-TK转染肝癌细胞和肝细胞,经RT-PCR和Western blot检测细胞中HSVtk表达情况,流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡情况。
结果经GP73修饰的lipoplexes转染的肝癌细胞组[(26.37±0.76)%]比肝细胞组[(9.68±0.57)%]有更高的转染效率和更多的HSVtk基因的表达,肝癌细胞增殖能力明显减弱,凋亡显著。
结论GP73修饰的lipoplexes介导的HSVtk自杀基因系统对肝癌细胞有治疗作用,可以尝试作为一种靶向性杀伤肝癌细胞的非病毒基因转运载体。