【摘 要】
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目的探讨一种简单快捷、廉价高效的小鼠胰岛分离与纯化方法。方法采用自制的穿刺针由胆总管逆行穿刺并灌注胶原酶Ⅴ消化胰腺，使用仅一种密度梯度介质离心结合手工挑选的方法分离纯化6~8周龄雄性ICR小鼠胰岛。同时，以单纯手工挑选法纯化胰岛作为对照组。双硫腙染色鉴定获取胰岛纯度，吖啶橙/碘化丙啶染色鉴定胰岛活力。采用不同浓度葡萄糖(低糖2.8 mmol/L，高糖20.0 mmol/L)刺激的胰岛素释放实验检测
【机 构】
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210009 南京，东南大学附属中大医院内分泌科东南大学医学院糖尿病研究所,210009 南京，东南大学附属中大医院内分泌科东南大学医学院糖尿病研究所,210009 南京，东南大学附属中大医院内分泌科
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目的探讨一种简单快捷、廉价高效的小鼠胰岛分离与纯化方法。
方法采用自制的穿刺针由胆总管逆行穿刺并灌注胶原酶Ⅴ消化胰腺，使用仅一种密度梯度介质离心结合手工挑选的方法分离纯化6~8周龄雄性ICR小鼠胰岛。同时，以单纯手工挑选法纯化胰岛作为对照组。双硫腙染色鉴定获取胰岛纯度，吖啶橙/碘化丙啶染色鉴定胰岛活力。采用不同浓度葡萄糖(低糖2.8 mmol/L，高糖20.0 mmol/L)刺激的胰岛素释放实验检测胰岛功能。采用t检验比较两组间的差异。
结果采用自制穿刺针及密度梯度离心的新方法提取5只小鼠胰岛整体耗时152 min，而单纯手工挑选法则耗时347 min；新方法每只小鼠平均可得胰岛(95±8)个，略低于单纯手工挑选组的(124±10)个(t=4.027，P=0.016)；但新方法所得胰岛纯度为92.6%±1.3%，显著高于单纯手工挑选法79.2%±5.5%(t=4.075，P=0.015)。同时新方法所提取的胰岛活力与手工挑选法获得的胰岛的活力相当。新方法获得的胰岛在低糖和高糖刺激下上清中胰岛素分泌量分别为(66±13)和(256±46) μg/L(t=7.042，P=0.002)，提示这种新方法获取的胰岛对糖的反应很灵敏。
结论采用自制的穿刺针及密度梯度离心的方法所得胰岛产量、纯度、活力及胰岛功能都相对良好，是一种简单快捷、廉价高效的小鼠胰岛分离方法。
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