【摘 要】
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目的 构建基于时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)的高灵敏性、高特异性的Ⅰ型志贺毒素(StxⅠ)双抗体夹心免疫检测法,用于产志贺毒素大肠杆菌(STEC)感染的临床快速诊断.方法 采
【机 构】
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江苏省疾病预防控制中心,中国卫生与健康委员会肠道病原微生物重点实验室,江苏南京210009
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目的 构建基于时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)的高灵敏性、高特异性的Ⅰ型志贺毒素(StxⅠ)双抗体夹心免疫检测法,用于产志贺毒素大肠杆菌(STEC)感染的临床快速诊断.方法 采用两株针对StxⅠ不同表位的单克隆抗体2F6-F8和8E7-E6,构建双抗体夹心TRFIA,并评价该方法的灵敏度、特异性以及稳定性;以PCR检测stxⅠ基因结果为金标准,以TRFIA、ELISA、Duopath(R)Verotoxins免疫胶体金检测试剂盒,检测54例StxⅠ毒素粗提物,比较灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和与PCR法的一致性.结果 建立的以StxⅠ为靶向分子的TRFIA,可以在2h内完成对StxⅠ检测,检测最大稀释倍数为1∶1 000的StxⅠ阳性菌株毒素粗提物样本,灵敏度比ELISA提高了约2个数量级.Stx Ⅰ的TRFIA与StxⅡ型无交叉反应,检测结果在1个月内仍保持较高稳定性.与PCR方法相比,TRFIA灵敏度(93.8％)高于ELISA(82.4％)和Duo-path(R)Verotoxins免疫胶体金(57.1％),差异有统计学意义(P＜0.05);其特异性(100.0％)、阳性预测值(100.0％)、阴性预测值(97.4％)均大于等于ELISA(分别为97.2％、93.3％、92.1％)和Duopath(R)Verotoxins免疫胶体金(分别为100.0％、100.0％、87.0％);TRFIA检测结果与PCR一致性(Kappa=0.955)高于ELISA (Kappa=0.809)法和Duopath(R)Verotoxins免疫胶体金(Kappa=0.664).结论 成功构建StxⅠ-TRFIA快速检测方法检测样品中StxⅠ毒素,为TRFIA在毒素检测方面的推广应用提供了依据.
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