【摘 要】
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以Lysinibacillus fusiformis为出发菌,分别转染Sig A和Sig B突变基因,获得耐高乙醇和低p H胁迫的优良己酸产生菌。以p ET32a(+)-Sig A/Sig B为模板,采用均匀试验优化Sig A/Sig
【机 构】
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泸州职业技术学院白酒学院,泸州市生物医学工程研究所,新乡医学院第三附属医院检验科,泸州老窖股份有限责任公司,泸州江潭窖酒业有限公司
【基金项目】
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四川省科技支撑计划项目(NO.2014FZ0018), 四川省教育厅理工重点项目(18ZA0250), 泸州市科学技术和知识产权局社会发展重点项目(2017-S-45(3/3))
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以Lysinibacillus fusiformis为出发菌,分别转染Sig A和Sig B突变基因,获得耐高乙醇和低p H胁迫的优良己酸产生菌。以p ET32a(+)-Sig A/Sig B为模板,采用均匀试验优化Sig A/Sig B易错聚合酶链式反应(ep PCR)扩增体系中的Mn2+和Mg2+浓度,通过ep PCR获得ep-Sig A/Sig B突变基因,与载体p BE3-MCS连接后,构建L.fusiformis-p BE3-ep-Sig A/Sig B突变菌体库,将两种菌体库在p H值25和乙醇含量2%12%条件下进行筛选。结果表明,L.fusiformis-p BE3-ep-Sig B重组菌株耐受最高乙醇含量为8%左右,最低耐受p H值为2.5左右;当乙醇含量为8%、p H值为3.5时,L.fusiformis-p BE3-ep-Sig B重组菌株的己酸产量达到(254.35±39.74)mg/100 m L,显著高于工程菌株L.fusiformis-p BE3-ep-Sig A的己酸产量(P<0.01),且为出发菌L.fusiformis己酸产量(93.62±10.33)mg/100 m L的271.68%,表明L.fusiformis-p BE3-ep-Sig B重组菌株具有较强的抗高乙醇浓度和低p H值胁迫产己酸的能力。
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