观察慢性丙型肝炎患者Notch信号通路分子和Toll样受体4(TLR4)的表达变化以及二者的相互作用对CD14+单核细胞功能的影响。
方法收集2017年8月至10月在陕西省人民医院就诊的慢性丙型肝炎初治患者24例和健康志愿者10名,分选CD14+单核细胞,应用Notch信号通路抑制剂DAPT刺激或使用TLR4 siRNA转染CD14+单核细胞,应用实时定量PCR法检测Notch1、Notch2、Hes1和Hes5 mRNA的水平,应用蛋白质印迹法检测TLR4蛋白水平和NF-κB的磷酸化,应用酶联免疫吸附法检测CD14+单核细胞分泌细胞因子的水平。组间比较采用t检验或配对t检验。
结果Notch1 mRNA相对表达量(3.97±2.03对比0.91±0.76,P < 0.01)和Notch信号通路下游分子Hes1 mRNA相对表达量(5.96±2.31对比0.99±0.45,P < 0.01)、Hes5 mRNA相对表达量(4.31±1.05对比0.84±0.20,P < 0.01)在慢性丙型肝炎患者CD14+单核细胞中的表达较健康志愿者亦显著升高。TLR4 mRNA相对表达量(5.14±1.09对比1.27±0.39)和蛋白水平在慢性丙型肝炎患者CD14+单核细胞中的表达较健康志愿者显著升高(P < 0.01)。应用DAPT抑制Notch信号通路可降低慢性丙型肝炎患者CD14+单核细胞中TLR4 mRNA相对表达量(2.58±1.36对比4.34±1.88,P < 0.05)和蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,其分泌单核细胞趋化蛋白-1[(94.32±23.59) pg/ml对比(64.07±9.39) pg/ml,P < 0.01]和白细胞介素-8[(12.54±4.89) pg/ml对比(7.92±3.01) pg/ml,P < 0.05]的水平亦显著降低。TLR4 siRNA转染可降低慢性丙型肝炎患者CD14+单核细胞中Notch1 mRNA的表达[2.09±1.72对比3.73±1.75,P < 0.05],亦可降低Hes1 mRNA(2.87±0.84对比5.54±0.97,P < 0.01)和Hes5 mRNA(2.89±0.93对比4.51±1.54,P < 0.01)的表达。
结论慢性丙型肝炎患者中Notch信号通路与TLR4存在相互作用,可促进CD14+单核细胞的功能。