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论文摘要： 采用正交设计优化布洛芬传递体处方，制得的布洛芬传递体粒径分布为（122.3±31.9） nm，并以水甲醇（20∶80，0.1%三氟乙酸）为流动相，HPLC测其平均包封率为48.92%。初步稳定性考察表明，在低温（4℃）贮存7 d，制品平均粒径及分布变化小，药物泄漏少于3%，性质较稳定，为布洛芬新的给药技术提供了依据。
主题词： 布洛芬 制备
中图分类号：TF802.6
传递体（transfersomes，TF）是一种类脂聚集体，主要成分为磷脂和表面活性剂（如胆酸钠、去氧胆酸钠等）。粒径为数十至数百纳米，外观为胶体溶液，亦称为柔性纳米脂质体（flexible nanoliposomes，FNL）。TF是由脂质体处方改进而来，嵌入泡囊膜中的表面活性剂使其具有高度变形性，且能高效穿透比它本身小数倍的孔道，因此可用作各种大分子、水溶性或脂溶性药物载体。布洛芬（1）生物半衰期短，维持治疗浓度需频繁用药，可能增加胃肠道的不良反应及对肝、肾的损害作用。为减轻传递体的不良反应，近几年国内外研制了多种新制剂和制剂新技术，如口腔崩解片、眼用纳米混悬制剂、经皮给药微凝胶剂和脂质纳米囊载体。本试验结合传递体的理化特性，利用新型TF技术包封，以期减轻传递体的不良反应。
一、仪器与试药
FL 2200型液相色谱仪（杭州福立分析仪器有限公司）；Nicomp380 ZLS型激光散射粒度仪（美国PSS公司）；JY96Ⅲ型超声波细胞粉碎机（上海新芝生物研究所）。
1原药（山东新华制药厂，含量≥99.7%，批号071002）；1对照品（中国药品生物制品检定所，含量≥99.9%，批号100179200303）；大豆磷脂（上海金伴药业有限公司，批号20080904）；去氧胆酸钠（上海化学制剂供应站）；葡聚糖凝胶G50（上海化学试剂厂）；维生素E（VE，天津市光复精密化工研究所）。
二、方法与结果
1、TF的制备
尝试了薄膜分散法、乙醇注入法、乙醚注入法、反相蒸发法等制备方法，由于后3种方法难以得到脂质膜，故选用薄膜分散法。精密称取1 10 mg、大豆卵磷脂30 mg、去氧胆酸钠3.75 mg、VE 0.37 mg置磨口茄型瓶中，加入氯仿-甲醇（1∶1，v/v）8 ml，于35 ℃、30 r/min减压旋蒸除去有机溶剂，在茄形瓶内壁形成一层均匀的透明脂质薄膜，加重蒸水10 ml，于45℃、60 r/min继续旋蒸水化1 h，将所得的水化混悬液在冰浴条件下经超声波细胞粉碎机处理2次（100W），每次2.5 min，间隔30 s，再依次经0.8、0.45、0.22 μm微孔滤膜过滤，得半透明、具有淡蓝色乳光的1TF水分散体（1 mg/ml）。
2、TF形态及粒径考察
配制3%磷钨酸钠溶液，临用前调节pH值7.0，滴加到蜡板上，另将稀释至一定浓度的1TF样品滴到铜网正面，用滤纸吸去过多样品液，将铜网正面向下盖到染液滴上，负染色10min，取出铜网，用滤纸吸去过多染液，将铜网正面向下置于玻璃皿中，晾干，在透射电镜下观测其形态。从电镜视野可见，1TF形态均为球形或近球形，粒径在120±20nm，颗粒分布均匀。
采用动态光散射法测得1TF的粒径分布均较窄，符合Gaussian分布，卡方值小于3，平均粒径122.3 nm。
3、TF包封率测定
1）分析方法的建立色谱条件：色谱柱Venusil XBPC18柱（4.6 mm ×200 mm，5 μm），流动相 水甲醇（20∶80，含0.1%三氟乙酸）；检测波长263 nm，流速1 ml/min，柱温24 ℃，进样量20 μl。
线性关系：精密称取1对照品25 mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并定容。分别精密量取1标准溶液1、2、3、4、5、6 ml，置10 ml量瓶中，用流動相定容，得1浓度为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mg/ml的系列溶液。分别进样测定，记录峰面积（A），以1浓度（c）对A线性回归，得标准曲线方程A=1.39×103c9.42×104，R2=0.999 8。结果表明1浓度在0.05～0.3 mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系。取0.05、0.15、0.25 mg/ml 3种不同浓度1对照液，重复进样5次，连续测定5天，日内、日间RSD（%）分别为1.03、0.95、0.86和1.26、0.66、0.96，平均回收率为99.89%，RSD 0.75%。
TF包封率测定取同批1TF，共2份，每份2 ml。一份置10 ml量瓶中，以10% TritonX100溶液3 ml破乳，以流动相定容；另一份上葡聚糖凝胶G50柱，用pH 7.4磷酸盐缓冲液（PBS）洗脱，分离1TF与游离药物，将分离得到的1TF置10 ml量瓶中，以10% TritonX100溶液3 ml破乳，以流动相定容。将上述两份样品分别进样测定1的含量，第一份测得值为W总，第二份为W包，按下式计算包封率：包封率（%）=W包/W总×100。测得按最佳处方制备的3批1TF样品平均包封率为48.9%，RSD 0.61%（n =3）。
4、TF初步稳定性考察
1）TF粒径分布变化 将1TF分别置4、25和37 ℃保存，于0、1、2、3、4、5、6和7 d取样，以水稀释使大豆卵磷脂浓度为2 mmol/L，采用动态光散射法测定1TF样品的粒径分布。结果表明，1TF于4 ℃贮存7 d，平均粒径由122.3 nm略增至125.1 nm；粒径分布变化很小，变异系数（CV）由新鲜制备的0.261增至0.334。25和37 ℃条件贮存7 d，1TF平均粒径分别为134.8 nm和138.2 nm，比4 ℃保存显著增大（P<0.05）；1TF粒径分布也变宽，CV分别增至0.303和0.360。 放置不同时间1TF的粒径分布变化*注：* 新鲜制备的1TF粒径为（122.3±31.9） nm，CV为0.261。系列1：1TF（4 ℃）；系列2：1TF（25 ℃）
2）药物泄漏试验 药物泄漏试验采用透析法。将1TF透析介质（0.01 mol/L生理等渗PBS pH7.4）稀释至1浓度为0.5 mg/ml，取0.5 ml加至透析袋中，置装有40 ml透析介质的具塞三角烧瓶中，于4和25℃贮存7d，平行试验3份。分别于0.5、1、1.5、2、3、4、5、6和7d取样，HPLC法测定1含量，计算累积泄漏百分率。4 ℃保存时，1TF泄漏率很低，2 d内的累积泄漏百分率小于2.5%，7 d内的累积泄漏百分率小于3%；25 ℃保存时，1TF的泄漏率显著高于4 ℃，7 d超过12%。因此，1TF宜在低温（4 ℃）保存。
三、讨论
采用反相蒸发法制备1TF时，曾选用二氯甲烷和乙醚两种溶剂，但实验结果显示，该方法的重复性较差，其中后者更差，这可能与药物自身的性质有关。曾用乙醚注入法制备1TF，但因乙醚的沸点只有34.5 ℃，药物、磷脂及去氧胆酸钠在溶解时就会挥发一部分乙醚，同时在除去乙醚时，形成的1TF易结块，实际操作中，难以控制。最终选用经典的薄膜分散法制备1TF，所成膜均一。
传递体是弱酸性药物（pKa 4.4），在酸性条件下溶解度较低，主要以分子形式存在，较易透过角质层。因此为提高传递体的最低检测量，本试验用0.1%三氟乙酸将流动相调至pH2.0。
通常在pH 7.4缓冲液和4℃保存条件下，包载药物的传递体在短期内能保持较好的稳定性，之后内容物开始加快向外泄漏，这可能是传递体膜中的磷脂水解成溶血磷脂和游离脂肪酸，进而引起传递体膜的不稳定造成的。
参考文献：
1 、聂传平 曹洪昭 郭伟英，布洛芬传递体的制备及性质的研究，论文网，2011，06
主题词： 布洛芬 制备
中图分类号：TF802.6
传递体（transfersomes，TF）是一种类脂聚集体，主要成分为磷脂和表面活性剂（如胆酸钠、去氧胆酸钠等）。粒径为数十至数百纳米，外观为胶体溶液，亦称为柔性纳米脂质体（flexible nanoliposomes，FNL）。TF是由脂质体处方改进而来，嵌入泡囊膜中的表面活性剂使其具有高度变形性，且能高效穿透比它本身小数倍的孔道，因此可用作各种大分子、水溶性或脂溶性药物载体。布洛芬（1）生物半衰期短，维持治疗浓度需频繁用药，可能增加胃肠道的不良反应及对肝、肾的损害作用。为减轻传递体的不良反应，近几年国内外研制了多种新制剂和制剂新技术，如口腔崩解片、眼用纳米混悬制剂、经皮给药微凝胶剂和脂质纳米囊载体。本试验结合传递体的理化特性，利用新型TF技术包封，以期减轻传递体的不良反应。
一、仪器与试药
FL 2200型液相色谱仪（杭州福立分析仪器有限公司）；Nicomp380 ZLS型激光散射粒度仪（美国PSS公司）；JY96Ⅲ型超声波细胞粉碎机（上海新芝生物研究所）。
1原药（山东新华制药厂，含量≥99.7%，批号071002）；1对照品（中国药品生物制品检定所，含量≥99.9%，批号100179200303）；大豆磷脂（上海金伴药业有限公司，批号20080904）；去氧胆酸钠（上海化学制剂供应站）；葡聚糖凝胶G50（上海化学试剂厂）；维生素E（VE，天津市光复精密化工研究所）。
二、方法与结果
1、TF的制备
尝试了薄膜分散法、乙醇注入法、乙醚注入法、反相蒸发法等制备方法，由于后3种方法难以得到脂质膜，故选用薄膜分散法。精密称取1 10 mg、大豆卵磷脂30 mg、去氧胆酸钠3.75 mg、VE 0.37 mg置磨口茄型瓶中，加入氯仿-甲醇（1∶1，v/v）8 ml，于35 ℃、30 r/min减压旋蒸除去有机溶剂，在茄形瓶内壁形成一层均匀的透明脂质薄膜，加重蒸水10 ml，于45℃、60 r/min继续旋蒸水化1 h，将所得的水化混悬液在冰浴条件下经超声波细胞粉碎机处理2次（100W），每次2.5 min，间隔30 s，再依次经0.8、0.45、0.22 μm微孔滤膜过滤，得半透明、具有淡蓝色乳光的1TF水分散体（1 mg/ml）。
2、TF形态及粒径考察
配制3%磷钨酸钠溶液，临用前调节pH值7.0，滴加到蜡板上，另将稀释至一定浓度的1TF样品滴到铜网正面，用滤纸吸去过多样品液，将铜网正面向下盖到染液滴上，负染色10min，取出铜网，用滤纸吸去过多染液，将铜网正面向下置于玻璃皿中，晾干，在透射电镜下观测其形态。从电镜视野可见，1TF形态均为球形或近球形，粒径在120±20nm，颗粒分布均匀。
采用动态光散射法测得1TF的粒径分布均较窄，符合Gaussian分布，卡方值小于3，平均粒径122.3 nm。
3、TF包封率测定
1）分析方法的建立色谱条件：色谱柱Venusil XBPC18柱（4.6 mm ×200 mm，5 μm），流动相 水甲醇（20∶80，含0.1%三氟乙酸）；检测波长263 nm，流速1 ml/min，柱温24 ℃，进样量20 μl。
线性关系：精密称取1对照品25 mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并定容。分别精密量取1标准溶液1、2、3、4、5、6 ml，置10 ml量瓶中，用流動相定容，得1浓度为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mg/ml的系列溶液。分别进样测定，记录峰面积（A），以1浓度（c）对A线性回归，得标准曲线方程A=1.39×103c9.42×104，R2=0.999 8。结果表明1浓度在0.05～0.3 mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系。取0.05、0.15、0.25 mg/ml 3种不同浓度1对照液，重复进样5次，连续测定5天，日内、日间RSD（%）分别为1.03、0.95、0.86和1.26、0.66、0.96，平均回收率为99.89%，RSD 0.75%。
TF包封率测定取同批1TF，共2份，每份2 ml。一份置10 ml量瓶中，以10% TritonX100溶液3 ml破乳，以流动相定容；另一份上葡聚糖凝胶G50柱，用pH 7.4磷酸盐缓冲液（PBS）洗脱，分离1TF与游离药物，将分离得到的1TF置10 ml量瓶中，以10% TritonX100溶液3 ml破乳，以流动相定容。将上述两份样品分别进样测定1的含量，第一份测得值为W总，第二份为W包，按下式计算包封率：包封率（%）=W包/W总×100。测得按最佳处方制备的3批1TF样品平均包封率为48.9%，RSD 0.61%（n =3）。
4、TF初步稳定性考察
1）TF粒径分布变化 将1TF分别置4、25和37 ℃保存，于0、1、2、3、4、5、6和7 d取样，以水稀释使大豆卵磷脂浓度为2 mmol/L，采用动态光散射法测定1TF样品的粒径分布。结果表明，1TF于4 ℃贮存7 d，平均粒径由122.3 nm略增至125.1 nm；粒径分布变化很小，变异系数（CV）由新鲜制备的0.261增至0.334。25和37 ℃条件贮存7 d，1TF平均粒径分别为134.8 nm和138.2 nm，比4 ℃保存显著增大（P<0.05）；1TF粒径分布也变宽，CV分别增至0.303和0.360。 放置不同时间1TF的粒径分布变化*注：* 新鲜制备的1TF粒径为（122.3±31.9） nm，CV为0.261。系列1：1TF（4 ℃）；系列2：1TF（25 ℃）
2）药物泄漏试验 药物泄漏试验采用透析法。将1TF透析介质（0.01 mol/L生理等渗PBS pH7.4）稀释至1浓度为0.5 mg/ml，取0.5 ml加至透析袋中，置装有40 ml透析介质的具塞三角烧瓶中，于4和25℃贮存7d，平行试验3份。分别于0.5、1、1.5、2、3、4、5、6和7d取样，HPLC法测定1含量，计算累积泄漏百分率。4 ℃保存时，1TF泄漏率很低，2 d内的累积泄漏百分率小于2.5%，7 d内的累积泄漏百分率小于3%；25 ℃保存时，1TF的泄漏率显著高于4 ℃，7 d超过12%。因此，1TF宜在低温（4 ℃）保存。
三、讨论
采用反相蒸发法制备1TF时，曾选用二氯甲烷和乙醚两种溶剂，但实验结果显示，该方法的重复性较差，其中后者更差，这可能与药物自身的性质有关。曾用乙醚注入法制备1TF，但因乙醚的沸点只有34.5 ℃，药物、磷脂及去氧胆酸钠在溶解时就会挥发一部分乙醚，同时在除去乙醚时，形成的1TF易结块，实际操作中，难以控制。最终选用经典的薄膜分散法制备1TF，所成膜均一。
传递体是弱酸性药物（pKa 4.4），在酸性条件下溶解度较低，主要以分子形式存在，较易透过角质层。因此为提高传递体的最低检测量，本试验用0.1%三氟乙酸将流动相调至pH2.0。
通常在pH 7.4缓冲液和4℃保存条件下，包载药物的传递体在短期内能保持较好的稳定性，之后内容物开始加快向外泄漏，这可能是传递体膜中的磷脂水解成溶血磷脂和游离脂肪酸，进而引起传递体膜的不稳定造成的。
参考文献：
1 、聂传平 曹洪昭 郭伟英，布洛芬传递体的制备及性质的研究，论文网，2011，06