【摘 要】
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目的: 在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体.方法: 通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和 K116W的表达载体, 并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表
【机 构】
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上海中科伍佰豪生物工程有限公司,中国科学院研究生院,上海,200233
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目的: 在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体.方法: 通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和 K116W的表达载体, 并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达.对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性.用Western blot检测hIL-3突变体的特异性.单溶液细胞增殖(MTS)测定hIL-3突变体的生物学活性.结果: hIL-3在大肠杆菌中高效表达, 表达量占菌体总蛋白的40%以上, 主要以包涵体的形式存在.将包涵体溶解在8 mol/L脲中, 经Ni-NTA-Sepharose柱纯化后纯度达90%以上.MTS法测定hIL-3突变体K116V的活性为野生型的5倍, K116W的生物学活性也有所增加.结论: 获得了高活性的hIL-3突变体K116V, 有望成为hIL-3的替代品, 也证明了hIL-3第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的生物学活性很重要.
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