【摘 要】
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目的 评估外周血不同预处理方法以及储存时长对RNA质量的影响,优化外周血的保存方法.方法 选取8种预处理方法对3名健康无关个体的外周血进行预处理并保存在-80℃条件下,使用Quick-RNATM Miniprep Plus试剂盒提取样本总RNA.采用外周血添加DNA/RNA ShieldTM的方法对外周血样本进行处理后于-80℃条件下分别保存0、5、10、15、30和60 d后抽提总RNA并测定RNA的浓度、纯度以及完整性.采用SPSS 22.0软件对RNA的产量、纯度以及完整性进行比较.结果 纯度方面,
【机 构】
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司法鉴定科学研究院 上海市法医学重点实验室 司法部司法鉴定重点实验室 上海市司法鉴定专业技术服务平台,上海 200063;内蒙古医科大学法医学教研室,内蒙古 呼和浩特 010030;南方医科大学法医学
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目的 评估外周血不同预处理方法以及储存时长对RNA质量的影响,优化外周血的保存方法.方法 选取8种预处理方法对3名健康无关个体的外周血进行预处理并保存在-80℃条件下,使用Quick-RNATM Miniprep Plus试剂盒提取样本总RNA.采用外周血添加DNA/RNA ShieldTM的方法对外周血样本进行处理后于-80℃条件下分别保存0、5、10、15、30和60 d后抽提总RNA并测定RNA的浓度、纯度以及完整性.采用SPSS 22.0软件对RNA的产量、纯度以及完整性进行比较.结果 纯度方面,白细胞加RNAlaterTM法和直接冻存法最差,其余6种方法纯度较好;产量方面,血细胞加DNA/RNA ShieldTM法产量最高,外周血加DNA/RNA ShieldTM法次之;完整性方面,PAXgene全血RNA管法最好,除外周血加DNA/RNA ShieldTM法和血细胞加DNA/RNA ShieldTM法外,其余5种与PAXgene全血RNA管法比较差异均具有统计学意义.6个储存时长的RNA纯度均在1.815～1.952,随着储存时长的增加,RNA产量和完整性均下降,其中产量从4.516 ng降至1.039 ng,完整性由8.533降至7.150.结论 综合RNA产量、纯度及完整性等因素,加DNA/RNA ShieldTM是一种较为理想的外周血预处理方法.在此基础上,样本可在低温条件下储存最多60 d.
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