【摘 要】
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利用PCR技术扩增获得C型口蹄疫病毒VP1基因,将其克隆到原核表达载体pET.30d(+)上,构建重组表达质粒pET-VP1。质粒pET-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导VP1基因的表达,收
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室,中农威特生物科技股份有限公司
【基金项目】
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国家支撑计划(2006BAD06A14).
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利用PCR技术扩增获得C型口蹄疫病毒VP1基因,将其克隆到原核表达载体pET.30d(+)上,构建重组表达质粒pET-VP1。质粒pET-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同时间的菌液进行SDS.PAGE、Western blot分析,结果得到分子量约为33ku的目的条带,表达产物占菌体总蛋白的35%,且该目的条带能被C型FMDV阳性血清识别,说明VP1基因在大肠杆菌中得到高效表达。融合表达蛋白经镍柱纯化,重组蛋白纯度达90%以上。
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