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摘要：多糖维持着生物体的各项机能[1].近年来人们对多糖的研究多在于其药理价值及生物活性方面，而对脱色及脱蛋白工艺的研究相对较少。本实验选用桑葚多糖作为实验材料旨在通过实验对多糖脱色及脱蛋白工艺进行初步探究。
关键词：桑葚;多糖;纯化工艺;脱色;脱蛋白
中图分类号：G4 文献标识码：A 文章编号：（2020）-37-354
引言
大量药理及临床研究证实，多糖具有调节免疫、抗癌、降胆固醇、降血脂等功能[2]，更是健康食品的营养保健添加剂。
桑葚（Fructus Mori）为桑科植物桑的干燥果穗，是一种药食两用天然植物。研究表明，桑葚中含有多酚、挥发油、多糖等化学成分具有抗氧化、降血脂、降糖和抗炎等生物活性[2-3]。
1 材料与方法
材料与仪器
桑葚 过氧化氢 活性炭
DM301型大孔树脂;D101型大孔树脂;AB-8型大孔树脂
多糖的制备
称取适量的新鲜桑葚原料清洗备用，以蒸馏水为提取剂采用热水浸提法提取多糖，将提取液进行浓缩至一定的体积后向浓缩液中加入乙醇，边加边搅拌至乙醇浓度达到85%为止。3000r/min 离心15min后去掉上层醇溶液，收集沉淀，得到桑葚粗多糖.
多糖的测定
使用苯酚硫酸法对多糖含量进行测定[4]。多糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物[5]。在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长490nm处吸光值A值与糖浓度C呈线性关系。
蛋白质的测定
蛋白质的存在增加了多糖的吸湿性，它们所带的电荷可吸附大量其它杂质，使其它杂质的去除变得困难。蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。
2 多糖的纯化工艺
多糖脱蛋白
本实验采用三氯乙酸法、sevag法和两种方法按一定的比例的混合对提取的蓝莓粗多糖进行脱蛋白工艺的考察。
多糖脱蛋白实验结果
三种方法的比较结果得出，不同方法对粗多糖中的蛋白质的脱除效果和对多糖的含量的影响并不一样。图1中明显的看到三种方法对多糖蛋白质的脱除率为TCA法>sevag法+TCA法>sevag法。从图2中可以明显看出三种方法脱蛋白后多糖含量最高的为TCA法，其次为sevage法-TCA法，多糖含量最低的为sevag法。通过三种方法处理蛋白质后，多糖的含量都有所下降，说明在处理的过程中多糖的含量都受到了影响。根据以上实验结果，TCA法脱蛋白的去除率高于其他两种，对于多糖含量的影响也小于其他两种方法。
活性炭脱色法：实验采用3种不同量的活性炭对桑葚多糖的脱色工艺进行考察。将称取的粗多糖用蒸馏水溶解后，等体积分装于6只烧杯中，分别向其中加入三种不同量的多糖搅拌均匀后静置1 h随后测定多糖含量。
大孔树脂脱色法：实验使用DM301型、D101型、AB-8型三种型号的大孔树脂对桑葚多糖进行脱色工艺考察。称取等量的桑葚粗多糖三份，随后等体积溶解，分别上样于三种大孔树脂层析柱，静态吸附1 h后，用等体积的蒸馏水分别对其进行洗脱。
多糖脱色实验结果
活性炭脱色：经三种不同量的活性炭脱色的桑葚多糖的含量变化如下表1所示，脱色效果如图3所示，经活性炭脱色后醇沉得到的多糖含量都有所降低，原因可能是活性炭颗粒有一定大小的孔径，这些孔径吸附了多糖，因此造成了多糖的含量降低。
大孔树脂脱色：通过表3实验数据得出，三种树脂对桑葚多糖脱色的能力存在一定的差异，从层析后收集的多糖颜色如图4所示，经D101型树脂脱色后的多糖明显淡于其他两种，脱色效果为D101>DM301>AB-8，对多糖的损耗程度为DM301>D101>AB-8。从脱色程度和多糖損耗上来看，D101型树脂更适合用于桑葚多糖的脱色。
3、结论
本文对桑葚多糖的纯化工艺进行了基础考察，得出以下结论。
1、在多糖脱蛋白中，三氯乙酸法脱蛋白的去除率高于其他两种，对于多糖含量的影响也小于其他两种方法。故在桑葚多糖的提取中采用三氯乙酸法脱蛋白较为合适。
2、在脱色过程中实验结果都不是很理想，可能是活性炭脱色并不是合适之选。相比之下活性炭比大孔树脂的脱色效果明显要好的多。综合考虑脱色程度和多糖损耗，大孔树脂中的D101型树脂更适合用于桑葚多糖的脱色。
参考文献
[1] 李琼.百合多糖提取纯化及结构研究[D].湖南农业大学.2010.
[2] 王金丹.桑葚多糖的提取工艺及生物活性研究进展[J].农业科技与装备.2017，（7）：63-64.
[3] Shenghua Zha， Qingsheng Zhao， Jinjin Chen.et al.Extraction， purification and antioxidant activities of the Polysaccharides from maca （Lepidium meyenii）.2014， Carbohydrate Polymers 111 （2014） 584–587
[4] 王振强，申森，樊欣.甘草多糖提取纯化工艺研究[J].食品研究与开发.2012;5（33）41-42.
[5] 樊君， 尚宏伟， 王华敏.大枣多糖的提取工艺研究[J].食品研究与开发， 2002， 23（3）： 29-31.
关键词：桑葚;多糖;纯化工艺;脱色;脱蛋白
中图分类号：G4 文献标识码：A 文章编号：（2020）-37-354
引言
大量药理及临床研究证实，多糖具有调节免疫、抗癌、降胆固醇、降血脂等功能[2]，更是健康食品的营养保健添加剂。
桑葚（Fructus Mori）为桑科植物桑的干燥果穗，是一种药食两用天然植物。研究表明，桑葚中含有多酚、挥发油、多糖等化学成分具有抗氧化、降血脂、降糖和抗炎等生物活性[2-3]。
1 材料与方法
材料与仪器
桑葚 过氧化氢 活性炭
DM301型大孔树脂;D101型大孔树脂;AB-8型大孔树脂
多糖的制备
称取适量的新鲜桑葚原料清洗备用，以蒸馏水为提取剂采用热水浸提法提取多糖，将提取液进行浓缩至一定的体积后向浓缩液中加入乙醇，边加边搅拌至乙醇浓度达到85%为止。3000r/min 离心15min后去掉上层醇溶液，收集沉淀，得到桑葚粗多糖.
多糖的测定
使用苯酚硫酸法对多糖含量进行测定[4]。多糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物[5]。在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长490nm处吸光值A值与糖浓度C呈线性关系。
蛋白质的测定
蛋白质的存在增加了多糖的吸湿性，它们所带的电荷可吸附大量其它杂质，使其它杂质的去除变得困难。蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。
2 多糖的纯化工艺
多糖脱蛋白
本实验采用三氯乙酸法、sevag法和两种方法按一定的比例的混合对提取的蓝莓粗多糖进行脱蛋白工艺的考察。
多糖脱蛋白实验结果
三种方法的比较结果得出，不同方法对粗多糖中的蛋白质的脱除效果和对多糖的含量的影响并不一样。图1中明显的看到三种方法对多糖蛋白质的脱除率为TCA法>sevag法+TCA法>sevag法。从图2中可以明显看出三种方法脱蛋白后多糖含量最高的为TCA法，其次为sevage法-TCA法，多糖含量最低的为sevag法。通过三种方法处理蛋白质后，多糖的含量都有所下降，说明在处理的过程中多糖的含量都受到了影响。根据以上实验结果，TCA法脱蛋白的去除率高于其他两种，对于多糖含量的影响也小于其他两种方法。
活性炭脱色法：实验采用3种不同量的活性炭对桑葚多糖的脱色工艺进行考察。将称取的粗多糖用蒸馏水溶解后，等体积分装于6只烧杯中，分别向其中加入三种不同量的多糖搅拌均匀后静置1 h随后测定多糖含量。
大孔树脂脱色法：实验使用DM301型、D101型、AB-8型三种型号的大孔树脂对桑葚多糖进行脱色工艺考察。称取等量的桑葚粗多糖三份，随后等体积溶解，分别上样于三种大孔树脂层析柱，静态吸附1 h后，用等体积的蒸馏水分别对其进行洗脱。
多糖脱色实验结果
活性炭脱色：经三种不同量的活性炭脱色的桑葚多糖的含量变化如下表1所示，脱色效果如图3所示，经活性炭脱色后醇沉得到的多糖含量都有所降低，原因可能是活性炭颗粒有一定大小的孔径，这些孔径吸附了多糖，因此造成了多糖的含量降低。
大孔树脂脱色：通过表3实验数据得出，三种树脂对桑葚多糖脱色的能力存在一定的差异，从层析后收集的多糖颜色如图4所示，经D101型树脂脱色后的多糖明显淡于其他两种，脱色效果为D101>DM301>AB-8，对多糖的损耗程度为DM301>D101>AB-8。从脱色程度和多糖損耗上来看，D101型树脂更适合用于桑葚多糖的脱色。
3、结论
本文对桑葚多糖的纯化工艺进行了基础考察，得出以下结论。
1、在多糖脱蛋白中，三氯乙酸法脱蛋白的去除率高于其他两种，对于多糖含量的影响也小于其他两种方法。故在桑葚多糖的提取中采用三氯乙酸法脱蛋白较为合适。
2、在脱色过程中实验结果都不是很理想，可能是活性炭脱色并不是合适之选。相比之下活性炭比大孔树脂的脱色效果明显要好的多。综合考虑脱色程度和多糖损耗，大孔树脂中的D101型树脂更适合用于桑葚多糖的脱色。
参考文献
[1] 李琼.百合多糖提取纯化及结构研究[D].湖南农业大学.2010.
[2] 王金丹.桑葚多糖的提取工艺及生物活性研究进展[J].农业科技与装备.2017，（7）：63-64.
[3] Shenghua Zha， Qingsheng Zhao， Jinjin Chen.et al.Extraction， purification and antioxidant activities of the Polysaccharides from maca （Lepidium meyenii）.2014， Carbohydrate Polymers 111 （2014） 584–587
[4] 王振强，申森，樊欣.甘草多糖提取纯化工艺研究[J].食品研究与开发.2012;5（33）41-42.
[5] 樊君， 尚宏伟， 王华敏.大枣多糖的提取工艺研究[J].食品研究与开发， 2002， 23（3）： 29-31.