【摘 要】
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目的探讨人骨形成蛋白-2(BMP-2)全长基因的克隆,及其真核表达重组子构建方法。方法采用Trizol法从人髁状突骨组织中提取制备总RNA,利用逆转录技术转录出BMP-2cDNA,以其为模版
【机 构】
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广州医学院第一附属医院口腔科,广州医学院第一附属医院检验科,广州医学院检验系学生
【基金项目】
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广东省科技厅项目(007B060401069);广州市科技局攻关项目(2007Z3-E0191);广州市教育局项目(61105)
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目的探讨人骨形成蛋白-2(BMP-2)全长基因的克隆,及其真核表达重组子构建方法。方法采用Trizol法从人髁状突骨组织中提取制备总RNA,利用逆转录技术转录出BMP-2cDNA,以其为模版,PCR扩增出BMP-2全长基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达重组子pcDNA3.1(+)/BMP-2,经酶切和序列分析鉴定重组子的构建情况。结果PCR扩增产物在1200000处有扩增条带,与目的基因大小相符,重组质粒经限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切后,得到5400000和1200000的BMP-2条带,BMP-2基因已成功克隆且成功与pcDNA3.1(+)连接。结论成功克隆出人BMP-2基因,并构建其真核表达重组子pcDNA3.1/BMP-2,为进一步研究BMP-2的功能、BMP-2基因在骨髓间充质细胞(hMSCs)中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础。
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