【摘 要】
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为了研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)RsbS蛋白的抗应激机制,本研究设计针对rsbS基因完整ORF的引物,PCR扩增rsbS基因,构建重组表达质粒pET-30a-rsbS,转化至表达菌株Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测,结果显示获得18.8 ku带His标签的重组RsbS蛋白,利用His-Ni纯化柱纯化重组RsbS蛋白,得到浓度约1 μg/mL的纯化蛋白.以纯化的重组RsbS蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,经间接ELISA测定抗体效价为1∶128 000;经western
【机 构】
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上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106;浙江大学医学院附属第二医院,浙江 杭州 310009
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为了研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)RsbS蛋白的抗应激机制,本研究设计针对rsbS基因完整ORF的引物,PCR扩增rsbS基因,构建重组表达质粒pET-30a-rsbS,转化至表达菌株Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测,结果显示获得18.8 ku带His标签的重组RsbS蛋白,利用His-Ni纯化柱纯化重组RsbS蛋白,得到浓度约1 μg/mL的纯化蛋白.以纯化的重组RsbS蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,经间接ELISA测定抗体效价为1∶128 000;经western blot检测RsbS多克隆抗体具有良好的反应原性.通过等温滴定量热试验检测与RsbS互作的蛋白,结果显示RsbS与其上游RsbR蛋白存在体外互作.将Lm野生株10403S和缺失株△rsbR分别接种至BHI液体培养基和含5％NaCl的BHI应激培养基培养后,分别采用荧光定量PCR和western blot对rsbS的转录和表达水平进行分析,结果显示经5％NaCl应激30 min后,野生株中rsbS的转录和表达水平增高,而缺失株中rsbS的转录和表达水平均降低.综上,本研究首次证实RsbS通过与RsbR蛋白互作参与Lm的抗应激反应.本研究为进一步揭示RsbS蛋白的生物学功能及Lm的抗应激机制研究奠定基础.
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化学反应法是通过对化学物质本身较为复杂性的特点进行探讨、分析,其技术涵盖了化学学科所有领域,而毒品的检验分析工作与化学反应法密切相关,在仪器分析的时期,化学物质的分析主要通过化学显色法、分子光谱法、色谱法与质谱法联合等技术,其中毒品检验分析中毛细管电泳仪器分析的方法是使用率最高的化学反应法,毒品的检验与初次筛选则更多采用了化学分析法.
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