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【摘要】 目的：探讨绝经妇女牙周炎患者龈沟液中骨保护素（OPG）和核因子-кB受体活化子配体（RANKL）的含量变化及意义。方法：采用吸潮纸尖法收集龈沟液（GCF）。酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked inmunosorbent assay， ELISA）测定龈沟液中的OPG、RANKL水平。结果：健康组和牙周炎组的GI、PLI、PD、AL比较，差异有统计学意义（P<0.01）；两组的龈沟液中RANKL、OPG及RANKL/OPG比值比较，差异存在统计学意义（P<0.01）。结论：绝经妇女龈沟液中RANKL增加、OPG减少与牙周炎的发生、发展有密切关系。
【关键词】 龈沟液； OPG； RANKL； 绝经妇女； 牙周炎
【Abstract】 Objective： To investigate the changes and significance of the receptor activator for osteoprotegerin （OPG） and receptor activator of nuclear factor kappa B ligand （RANKL） in gingival crevicular fluid （GCF） in postmenopausal women with periodontitis. Method： To follow careful sampling of GCF with moisture absorption paper point strips in patients. The level of OPG and RANKL was detected using ELISA technique. Result： The GI， PLI， PD， AL difference was significant between the two groups （P<0.01）. There was significant difference in levels of RANKL， OPG and the ratio of RANKL/OPG in GCF between the two groups （P<0.01）. Conclusion： The result suggests that the increasing production of RANKL and reducing production of OPG maybe associated with the initiation and progress of periodontitis.
【Key words】 Gingival crevicular fluid； OPG； RANKL； Postmenopausal women； Periodontitis
First-author’s address： Stomatological Hospital of Hebei United University， Tangshan 063000， China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.07.014
牙周炎是一种慢性非特异性疾病，细菌为主的多种因素的侵袭使牙周组织破坏，最终会导致牙齿松动甚至脱落。有关牙周炎的发病原因目前尚未十分清楚，是多种因素共同作用的结果。但近年来在牙周炎的免疫病理中趋化因子的作用越来越受到注意及重视。OPG是骨质改变过程中的重要影响因素[1-2]，牙周病患者的骨质改变显著。细胞核因子-кB受体活化子配体（receptor activator of nuclear NF-КB Ligand， RANKL）是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor， TNF）配体超家族中的成员，骨髓基质细胞或成骨细胞表面表达的RANKL或分泌到基质中的RANKL和破骨细胞前体表面受体核因子-кB活化因子（receptor activator of nuclear NF-КB， RANK）结合，使信号传到细胞内，进而引起破骨细胞前体分化、增值和成熟[3]。女性进入绝经期后，卵巢的功能会逐渐衰退而后丧失，雌激素的水平越来越低，绝经期妇女因没有雌激素的保护而全身骨质逐渐丢失且疏松，故增大了牙周病的易感性[4]。动物实验发现，去卵巢大鼠与未手术相比，骨小梁单位、厚度、及数量明显降低，密度也明显下降，牙槽骨变薄[5-6]。本研究对绝经妇女龈沟液中OPG及RANKL含量进行检测和对比，分析其与牙周炎的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年11月-2014年3月就诊于唐山市人民医院口腔科30例健康体检女性患者，年龄45～65岁，纳入标准：绝经年限≤3年，全身健康，无系统性疾病，口内至少有20颗牙齿，3个月内未接受牙周治疗并未使用抗生素、非甾体类药物和免疫抑制剂，不吸烟。同时选择此阶段初诊30例慢性牙周炎女性患者，年龄45～65岁，绝经年限≤3年，纳入标准除健康体检标准外还包括牙周袋≥3 mm、炎症累及牙周深层组织。
1.2 方法
1.2.1 GCF样本的采集和保存 常规洗手消毒后，用器械去除观察牙牙龈上的菌斑，隔湿并干燥观察牙。将提前裁剪好称重并消毒过的30号吸潮纸尖小心插入健康者观察牙的颊侧近中、颊侧中央、颊侧远中及腭侧龈沟内或牙周炎患者牙周袋内约1 mm，停留30 s后取出（若吸潮纸尖被血液或唾液污染则弃去）待1 min后重新取样。将4个吸潮纸尖作为一份标本，取出后称重，减去原重量换算成体积。然后将吸潮纸尖一并放入干燥无菌的EP管中，加入200 μL缓冲液后至于-70 ℃冰箱内保存待用。
1.2.2 牙周临床指标检测与记录 牙龈指数（GI按照loe和Silness标准分为4度）、菌斑指数（PLI按照Silness和loe标准分4度记录）、探查并记录探诊深度（PD）以及附着丧失（AL）[7]。所有患者的检查均由一个人来完成。为了避免临床检查影响龈沟液的质和量，取样后才进行临床指标的检测与记录。 1.2.3 龈沟液中OPG及RANKL的检测 将样本从-70 ℃冰箱中取出，在室温解冻样本，然后放置于摇床1 h后，离心5 min，除去吸潮纸尖，吸取上清液。然后按照ELISA试剂盒的说明书操作，检测各样本OPG及RANKL的浓度并记录。
1.3 统计学处理 使用SPSS 17.0软件进行统计学分析，牙龈指数、菌斑指数、探诊深度、附着丧失、OPG浓度、RANKL浓度及RANKL/OPG的比值比较采用配对样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者临床检查结果比较 牙周健康组患者的各项临床指标（包括GI、PLI、PD、AL）均明显高于牙周炎组患者，比较差异具有统计学意义（P<0.01）。
2.2 GCF中OPG、RANKL及RANKL/OPG比值的比较 牙周炎组的GCF中RANKL的含量及RANKL/OPG的比值明显高于牙周健康组，OPG的含量明显低于牙周炎组，两组比较差异具有统计学意义（P<0.01）。
3 讨论
研究显示，OPG/RANKL系统的不平衡，可能与牙周炎发病机制和牙周炎患者龈沟液OPG水平有关[8]。Bostanci等[9]对健康者、牙龈炎者、广泛侵袭性牙周炎者、慢性牙周炎者GCF中RANKL、OPG及RANKL/OPG比值进行比较，得出结果为健康者和牙龈炎者GCF中RANKL较低，而广泛侵袭性牙周炎者、慢性牙周炎者GCF中较高；OPG则健康者中较高；RANKL/OPG比值在健康者最低。研究发现，牙周炎患者龈沟液中RANKL浓度增高，OPG浓度明显下降，表明局部RANKL和OPG之间出现平衡失调，促进牙槽骨吸收[10]。
OPG及RANKL与绝经妇女全身骨质疏松关系密切，同时也在绝经妇女牙周炎中起着重要作用[11]。Xie等[12]发现口腔剩余牙槽骨吸收的主要因素之一是雌激素的缺乏。据报道，妇女绝经后每年骨吸收可达0.5%～1.0%，及时地补充雌激素，可以预防骨质疏松。患有骨质疏松的妇女与健康妇女相比，牙槽骨的密度和高度降低的几率有所增加，绝经牙周病妇女缺乏雌激素及骨质疏松均是牙槽骨密度降低的危险因素[13]。雌激素可以促进牙周膜的成纤维细胞向成骨分化，能增加成骨的活力，有利于维持牙周组织的正常改建及重塑，RANKL的表达与之关系密切[14-16]。
本研究探讨了绝经妇女GCF中OPG和RANKL浓度及RANKL/OPG比值与牙周炎的关系，证明OPG及RANKL与绝经牙周炎患者关系密切。有研究显示，雌激素替代疗法能够提高绝经妇女的雌激素水平，可减少牙周炎患者附着丧失及牙龈出血，能提高牙齿的保留率[17-18]。
参考文献
[1] Simonet W S， Lacey D L， Dunstan C R， et al. Osteoprotegerin： a novel secreted protein involved in the regulation of bone density[J]. Cell，1997，89（13）：309-319.
[2] Lacey D L， Timms E， Tan H L， et al. Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation[J]. Cell 1998，93（21）：165-176.
[3] Helena B， Kenweth B J， Olle V ， et al. Tumor necrosis factor α and βup-regulate the levels of osteoprotegerin mRNA in human osteosarcoma MG-63 cell[J]. Biochem Biophys Res Commun，1998，248（3）：454-457.
[4] Morishita M， Miyagi M， Iwamoto Y. Effect of sex homones on production of interleukin-1 by human peripheral monocytes[J]. J Periodontol，1999，70（7）：757-760.
[5] Tanaka M， Ejiri S， Toyooka E， et al. Effects of ovariectomy on trabecular structures of rat alveolar bone[J]. Periodontal Res，2002，37（2）：161-165.
[6] Tanaka M， Toyooka E， Kohno S，et al. Long-term changes in trabecular structure of aged rat alveolar bone after ovariectomy[J]. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endd，2003，95（4）：495-502.
[7]孟焕新.牙周病学[M].北京：人民卫生出版社，2010：118-124.
[8] Mogi M， Otogoto J， Ota N， et al. Differential expression of RANKL and osteoprotegerin in gingival crevicular fluid of patients with periodontitis[J]. Jouronal of Dental Research，2004，83（25）：166-169. [9] Bostanci N， Saygan B， Emingil G， et al. Effect of periodontal treatment on receptor activator of NF-kappa B ligand osteoprotegerin levels and relative ratio in gingival crevicular fluid[J]. Clin Periodontol，2011，51（38）：428-433.
[10]柳惠荣，张子彦，郭丽香.慢性牙周炎患者龈沟液OPG和RANKL的变化及意义[J].实用口腔医学杂志，2008，24（1）：129-131.
[11]王晓彦，耿发云，李红文，等.绝经妇女牙周炎基础治疗前后血清和龈沟液中白细胞介素-6含量变化研究[J].中国实用口腔科杂志，2011，4（9）：544-545.
[12] Xie Q F， Ainamo A， Tilvis R. Association of residual ridge resorption with systemic factors in home-living elderly subjects[J]. Acta Odontol Scand，1997，55（5）：299-305.
[13] Payne J B， Reinhardt R A， Nummikoski P V， et al. Longitudinal alveolar bone loss in postmenopausal osteoporotic/osteopenic women[J]. Osteoporos Int，1999，10（1）：34-40.
[14]高颖，陈莹，陶安军，等.各种生长因子对牙周膜细胞分化的影响及研究进展[J].口腔医学研究，2008，24（2）：224-226.
[15]王燕，丁寅，李永明，等.内皮素促人牙周膜成纤维细胞生长作用的体外研究[J].口腔医学研究，2006，22（3）：258-261.
[16] Tuschl T， Zamore P D， Lehmann R， et al. Targeted mRAN degradation by double-stranded RNA in vitro[J]. Genes Dev，1999，13（24）：3191-3197.
[17] Ronderos M， Jacobs D R， Himes J H，et al. Associations of periodontal disease with femoral bone mineral density and estrogen replacement therapy： cross-sectional evaluation of US adults from NHANES Ⅲ[J]. Clin Periodontol，2000，27（10）：778-786.
[18] Hildebolt C F， Pilgram T K， Yokoyama-Crothers N， et al. The pattern of alveolar crest height change in healthy postmenopausal women after 3 years of hormone/estrogen replacement therapy[J]. Clin Osteoporos，2002，73（11）：1279-1284.
（收稿日期：2014-11-18） （本文编辑：王宇）
【关键词】 龈沟液； OPG； RANKL； 绝经妇女； 牙周炎
【Abstract】 Objective： To investigate the changes and significance of the receptor activator for osteoprotegerin （OPG） and receptor activator of nuclear factor kappa B ligand （RANKL） in gingival crevicular fluid （GCF） in postmenopausal women with periodontitis. Method： To follow careful sampling of GCF with moisture absorption paper point strips in patients. The level of OPG and RANKL was detected using ELISA technique. Result： The GI， PLI， PD， AL difference was significant between the two groups （P<0.01）. There was significant difference in levels of RANKL， OPG and the ratio of RANKL/OPG in GCF between the two groups （P<0.01）. Conclusion： The result suggests that the increasing production of RANKL and reducing production of OPG maybe associated with the initiation and progress of periodontitis.
【Key words】 Gingival crevicular fluid； OPG； RANKL； Postmenopausal women； Periodontitis
First-author’s address： Stomatological Hospital of Hebei United University， Tangshan 063000， China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.07.014
牙周炎是一种慢性非特异性疾病，细菌为主的多种因素的侵袭使牙周组织破坏，最终会导致牙齿松动甚至脱落。有关牙周炎的发病原因目前尚未十分清楚，是多种因素共同作用的结果。但近年来在牙周炎的免疫病理中趋化因子的作用越来越受到注意及重视。OPG是骨质改变过程中的重要影响因素[1-2]，牙周病患者的骨质改变显著。细胞核因子-кB受体活化子配体（receptor activator of nuclear NF-КB Ligand， RANKL）是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor， TNF）配体超家族中的成员，骨髓基质细胞或成骨细胞表面表达的RANKL或分泌到基质中的RANKL和破骨细胞前体表面受体核因子-кB活化因子（receptor activator of nuclear NF-КB， RANK）结合，使信号传到细胞内，进而引起破骨细胞前体分化、增值和成熟[3]。女性进入绝经期后，卵巢的功能会逐渐衰退而后丧失，雌激素的水平越来越低，绝经期妇女因没有雌激素的保护而全身骨质逐渐丢失且疏松，故增大了牙周病的易感性[4]。动物实验发现，去卵巢大鼠与未手术相比，骨小梁单位、厚度、及数量明显降低，密度也明显下降，牙槽骨变薄[5-6]。本研究对绝经妇女龈沟液中OPG及RANKL含量进行检测和对比，分析其与牙周炎的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年11月-2014年3月就诊于唐山市人民医院口腔科30例健康体检女性患者，年龄45～65岁，纳入标准：绝经年限≤3年，全身健康，无系统性疾病，口内至少有20颗牙齿，3个月内未接受牙周治疗并未使用抗生素、非甾体类药物和免疫抑制剂，不吸烟。同时选择此阶段初诊30例慢性牙周炎女性患者，年龄45～65岁，绝经年限≤3年，纳入标准除健康体检标准外还包括牙周袋≥3 mm、炎症累及牙周深层组织。
1.2 方法
1.2.1 GCF样本的采集和保存 常规洗手消毒后，用器械去除观察牙牙龈上的菌斑，隔湿并干燥观察牙。将提前裁剪好称重并消毒过的30号吸潮纸尖小心插入健康者观察牙的颊侧近中、颊侧中央、颊侧远中及腭侧龈沟内或牙周炎患者牙周袋内约1 mm，停留30 s后取出（若吸潮纸尖被血液或唾液污染则弃去）待1 min后重新取样。将4个吸潮纸尖作为一份标本，取出后称重，减去原重量换算成体积。然后将吸潮纸尖一并放入干燥无菌的EP管中，加入200 μL缓冲液后至于-70 ℃冰箱内保存待用。
1.2.2 牙周临床指标检测与记录 牙龈指数（GI按照loe和Silness标准分为4度）、菌斑指数（PLI按照Silness和loe标准分4度记录）、探查并记录探诊深度（PD）以及附着丧失（AL）[7]。所有患者的检查均由一个人来完成。为了避免临床检查影响龈沟液的质和量，取样后才进行临床指标的检测与记录。 1.2.3 龈沟液中OPG及RANKL的检测 将样本从-70 ℃冰箱中取出，在室温解冻样本，然后放置于摇床1 h后，离心5 min，除去吸潮纸尖，吸取上清液。然后按照ELISA试剂盒的说明书操作，检测各样本OPG及RANKL的浓度并记录。
1.3 统计学处理 使用SPSS 17.0软件进行统计学分析，牙龈指数、菌斑指数、探诊深度、附着丧失、OPG浓度、RANKL浓度及RANKL/OPG的比值比较采用配对样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者临床检查结果比较 牙周健康组患者的各项临床指标（包括GI、PLI、PD、AL）均明显高于牙周炎组患者，比较差异具有统计学意义（P<0.01）。
2.2 GCF中OPG、RANKL及RANKL/OPG比值的比较 牙周炎组的GCF中RANKL的含量及RANKL/OPG的比值明显高于牙周健康组，OPG的含量明显低于牙周炎组，两组比较差异具有统计学意义（P<0.01）。
3 讨论
研究显示，OPG/RANKL系统的不平衡，可能与牙周炎发病机制和牙周炎患者龈沟液OPG水平有关[8]。Bostanci等[9]对健康者、牙龈炎者、广泛侵袭性牙周炎者、慢性牙周炎者GCF中RANKL、OPG及RANKL/OPG比值进行比较，得出结果为健康者和牙龈炎者GCF中RANKL较低，而广泛侵袭性牙周炎者、慢性牙周炎者GCF中较高；OPG则健康者中较高；RANKL/OPG比值在健康者最低。研究发现，牙周炎患者龈沟液中RANKL浓度增高，OPG浓度明显下降，表明局部RANKL和OPG之间出现平衡失调，促进牙槽骨吸收[10]。
OPG及RANKL与绝经妇女全身骨质疏松关系密切，同时也在绝经妇女牙周炎中起着重要作用[11]。Xie等[12]发现口腔剩余牙槽骨吸收的主要因素之一是雌激素的缺乏。据报道，妇女绝经后每年骨吸收可达0.5%～1.0%，及时地补充雌激素，可以预防骨质疏松。患有骨质疏松的妇女与健康妇女相比，牙槽骨的密度和高度降低的几率有所增加，绝经牙周病妇女缺乏雌激素及骨质疏松均是牙槽骨密度降低的危险因素[13]。雌激素可以促进牙周膜的成纤维细胞向成骨分化，能增加成骨的活力，有利于维持牙周组织的正常改建及重塑，RANKL的表达与之关系密切[14-16]。
本研究探讨了绝经妇女GCF中OPG和RANKL浓度及RANKL/OPG比值与牙周炎的关系，证明OPG及RANKL与绝经牙周炎患者关系密切。有研究显示，雌激素替代疗法能够提高绝经妇女的雌激素水平，可减少牙周炎患者附着丧失及牙龈出血，能提高牙齿的保留率[17-18]。
参考文献
[1] Simonet W S， Lacey D L， Dunstan C R， et al. Osteoprotegerin： a novel secreted protein involved in the regulation of bone density[J]. Cell，1997，89（13）：309-319.
[2] Lacey D L， Timms E， Tan H L， et al. Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation[J]. Cell 1998，93（21）：165-176.
[3] Helena B， Kenweth B J， Olle V ， et al. Tumor necrosis factor α and βup-regulate the levels of osteoprotegerin mRNA in human osteosarcoma MG-63 cell[J]. Biochem Biophys Res Commun，1998，248（3）：454-457.
[4] Morishita M， Miyagi M， Iwamoto Y. Effect of sex homones on production of interleukin-1 by human peripheral monocytes[J]. J Periodontol，1999，70（7）：757-760.
[5] Tanaka M， Ejiri S， Toyooka E， et al. Effects of ovariectomy on trabecular structures of rat alveolar bone[J]. Periodontal Res，2002，37（2）：161-165.
[6] Tanaka M， Toyooka E， Kohno S，et al. Long-term changes in trabecular structure of aged rat alveolar bone after ovariectomy[J]. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endd，2003，95（4）：495-502.
[7]孟焕新.牙周病学[M].北京：人民卫生出版社，2010：118-124.
[8] Mogi M， Otogoto J， Ota N， et al. Differential expression of RANKL and osteoprotegerin in gingival crevicular fluid of patients with periodontitis[J]. Jouronal of Dental Research，2004，83（25）：166-169. [9] Bostanci N， Saygan B， Emingil G， et al. Effect of periodontal treatment on receptor activator of NF-kappa B ligand osteoprotegerin levels and relative ratio in gingival crevicular fluid[J]. Clin Periodontol，2011，51（38）：428-433.
[10]柳惠荣，张子彦，郭丽香.慢性牙周炎患者龈沟液OPG和RANKL的变化及意义[J].实用口腔医学杂志，2008，24（1）：129-131.
[11]王晓彦，耿发云，李红文，等.绝经妇女牙周炎基础治疗前后血清和龈沟液中白细胞介素-6含量变化研究[J].中国实用口腔科杂志，2011，4（9）：544-545.
[12] Xie Q F， Ainamo A， Tilvis R. Association of residual ridge resorption with systemic factors in home-living elderly subjects[J]. Acta Odontol Scand，1997，55（5）：299-305.
[13] Payne J B， Reinhardt R A， Nummikoski P V， et al. Longitudinal alveolar bone loss in postmenopausal osteoporotic/osteopenic women[J]. Osteoporos Int，1999，10（1）：34-40.
[14]高颖，陈莹，陶安军，等.各种生长因子对牙周膜细胞分化的影响及研究进展[J].口腔医学研究，2008，24（2）：224-226.
[15]王燕，丁寅，李永明，等.内皮素促人牙周膜成纤维细胞生长作用的体外研究[J].口腔医学研究，2006，22（3）：258-261.
[16] Tuschl T， Zamore P D， Lehmann R， et al. Targeted mRAN degradation by double-stranded RNA in vitro[J]. Genes Dev，1999，13（24）：3191-3197.
[17] Ronderos M， Jacobs D R， Himes J H，et al. Associations of periodontal disease with femoral bone mineral density and estrogen replacement therapy： cross-sectional evaluation of US adults from NHANES Ⅲ[J]. Clin Periodontol，2000，27（10）：778-786.
[18] Hildebolt C F， Pilgram T K， Yokoyama-Crothers N， et al. The pattern of alveolar crest height change in healthy postmenopausal women after 3 years of hormone/estrogen replacement therapy[J]. Clin Osteoporos，2002，73（11）：1279-1284.
（收稿日期：2014-11-18） （本文编辑：王宇）