棘孢木霉木聚糖酶Ⅱ结构基因和上游调控区的克隆及分析

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作者克隆及分析了棘孢木霉木聚糖酶Ⅱ结构基因和上游调控区,并获得了内源启动子。根据木霉属木聚糖酶Ⅱ结构基因及上游调控区的保守性,以棘孢木霉基因组DNA为模板,进行简并PCR扩增,产物纯化并克隆至T载体,经酶切鉴定后进行序列分析。扩增获得片段长1 875 bp,由795 bp的木聚糖酶II结构基因和1 080 bp的上游调控区组成。结构基因编码223个氨基酸,具有糖基水解酶第11家族的典型保守区域。上游调控区具备核心启动子和转录起始点,有CAAT-Box,TATA-Box等启动子特征元件,分析其还有CreI,AreA,XlnR,Ace1,AlcR等转录因子结合位点。综上表明,克隆的1 080 bp上游调控区是典型的丝状真菌基因启动子,可作为内源启动子用于构建棘孢木霉高效外源基因表达系统。
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