【摘 要】
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目的研究骨髓基质细胞(BMSC)对小鼠肌源性干细胞(MDSC)体外造血分化的影响并探讨作用机制。方法选择6～8周龄C57BL/6雄性小鼠4只;5 d龄C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度
【机 构】
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天津中医药大学中西医结合学院; 天津中医药大学研究生院;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81673732;81273892;30772881);2017年天津中医药大学中西医结合学院研究生创新基金(CXJJLX201708);天津市高等学校科技发展基金计划项目(20100205)
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目的研究骨髓基质细胞(BMSC)对小鼠肌源性干细胞(MDSC)体外造血分化的影响并探讨作用机制。方法选择6～8周龄C57BL/6雄性小鼠4只;5 d龄C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度离心法获取6～8周龄小鼠BMSC;同时利用混合酶消化联合磁珠分选法分离5d龄小鼠后肢骨骼肌干细胞抗原1阳性(SCA-1~+)MDSC,建立以BMSC为饲养细胞的共培养体系。MDSC随机分为3组,对照组为新鲜分离的MDSC,单培养组和共培养组分别进行单独培养或与BMSC共培养7 d。采用相差显微镜观察细胞形态;免疫细胞化学(ICC)法检测SCA-1表达;Western blot检测造血相关分子CD34和CD45表达,相对灰度法分析数据;real-time RT-PCR检测Wnt信号通路相关分子的转录水平,数据采用AACt相对定量法分析。结果富集的MDSC胞体小而圆,表达SCA-1;单培养组细胞贴壁生长,呈梭形或纺锤形,可形成多核肌管;共培养组除少量细胞贴壁生长外,可见大量小圆细胞悬浮生长;与对照组相比,单培养组CD34和CD45表达未见显著变化,共培养组显著提高,差异有明显统计学意义(CD34,t=9.068,P=0.010;CD45,t=4.860,P=0.018);在基因转录水平,与对照组比较,单培养组Wnt5a转录水平提高(t=7.395,P=0.018),共培养组Wnt2、Wnt3、CCND1和myc表达上调(Wnt2, t=4.964,P=0.008;Wnt3,t=9.513,P=0.010;CCND1,t=9.688,P=0.010;myc,t=7.985,P=0.005)。结论 MDSC单独培养时以成肌分化为主;与BMSC共培养时发生造血分化,机制可能与激活经典Wnt信号通路有关。
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