【摘 要】
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目的:探讨信号转导与转录激活子1(STAT1)对高迁移率族蛋白1(HMGB1)启动子转录的调控作用.方法:在小鼠巨噬细胞RAW264.7中,转染siRNA-STAT1质粒,检测HMGB1转录水平的变化.生物
【机 构】
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广州医科大学附属市一医院,广东 广州,510000
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目的:探讨信号转导与转录激活子1(STAT1)对高迁移率族蛋白1(HMGB1)启动子转录的调控作用.方法:在小鼠巨噬细胞RAW264.7中,转染siRNA-STAT1质粒,检测HMGB1转录水平的变化.生物信息学方法预测STAT1与HMGB1基因启动子的结合位点,并据此构建HMGB1基因启动子全长和3个截短的荧光素酶报告基因,将含STAT1的真核表达载体pcDNA3.1-STAT1和上述构建的荧光素酶报告基因共转染人肾293T细胞,检测各组转染细胞的荧光素酶活性.利用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验分析STAT1与HMGB1启动子的结合情况.结果:转染siRNA-STAT1质粒可下调HMGB1基因在RAW264.7细胞的转录水平.酶切及测序结果表明,获得的4个不同长度的HMGB1启动子克隆与Genbank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确.pcDNA3.1-STAT1质粒和HMGB1启动子-1700～-700bp区域共转染荧光素酶活性最强.ChIP结果显示,STAT1直接结合在HMGB1启动子-1700～-700bp区域上.结论:成功构建了HMGB1基因启动子全长及各截短片段荧光素酶报告质粒,并初步确定了STAT1通过直接结合在HMGB1基因启动子1700～-700bp区域,活化HMGB1启动子活性,发挥上调HMGB1启动子转录的作用.
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