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【摘要】:目的:建立高效液相色谱法测定乌头汤水煎液中盐酸麻黄碱含量的方法｡方法:色谱柱为迪马KromasilC18 (5μm,250mm×4.6mm),流动相为乙腈:0.1%H3PO4=6:94,检测波长为207nm,流速为1.0mL/min｡结果:盐酸麻黄碱进样量在0.02504~0.17528μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999,n=7),平均回收率分别为97.16%､101.45%､100.15%,RSD值分别为0.53%､1.80%､0.25%｡结论:本方法操作简便､可靠,可用于乌头汤水煎液中盐酸麻黄碱的含量测定｡
【关键词】:盐酸麻黄碱 高效液相色谱法 乌头汤
【中图分类号】R284.1;R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8517(2008)07-0033-03乌头汤来源于《金匮要略》, 由制川乌､麻黄､黄芪､白芍､炙甘草组成,具有“温经去濕,散寒止痛”之功效,现代医家多以为基本方进行加减,用于类风湿性关节炎､坐骨神经痛､寒凝头痛, 痹证等症的治疗都取得了很好的效果犤1犦｡方中制川乌与麻黄相配, 祛痹止痛之力较著犤2犦,本实验采用HPLC法对乌头汤水煎液中盐酸麻黄碱含量进行了含量测定｡
1仪器与试药
1.1仪器岛津LC-20A型液相色谱仪, SPD-20A型紫外可见检测器;HT-20型柱温箱;TDL-5A型低速自动平衡离心机(湖南星科科学仪器公司)｡
1.2试药盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检验所, 批号:171241-200405); 药材均购自贵阳市同济堂药店(根据2005版《中国药典》一部各品种项下要求进行检测,均为合格品);乙腈为色谱纯(产地:天津市科密欧化学试剂有限公司,批号:20061022);H3PO4为分析纯｡
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱: 迪马Kromasil C18柱(5μm, 250mm×4.6mm); 流动相: 乙腈: 0.1%H3PO4=6: 94; 检测波长: 207nm 犤3犦; 流速:1.0mL/min;柱温:35℃;进样量:10μL｡2.2 对照品溶液､供试品溶液､阴性样品溶液的制备
2.2.1对照品溶液精密称取盐酸麻黄碱对照品6.26mg,置25mL容量瓶中,加0.01mol/L盐酸至刻度,摇匀｡精密量取上述对照品溶液2mL,置50mL容量瓶中,加0.01mol/L盐酸至刻度,配成每1mL含10.0160μg的溶液,摇匀,即得｡
2.2.2供试品溶液按处方量分别称取药材,其中制川乌先煎1h,再与其它四味共煎3次,第1次煎1h,第2､3次各煎0.5h,合并煎液,离心处理10min(3000r/min), 取上清液, 定容置1000mL, 摇匀｡精密吸取定容后的水煎液4mL,置10ml容量瓶中,加0.01mol/L盐酸稀释置刻度,摇匀, 放置过夜, 即得样品溶液｡进样前用0.45μm微孔滤膜滤过｡
2.2.3阴性样品溶液按供试品溶液相同的制备方法制得不含麻黄的阴性样品溶液｡
2.3线性范围的考察取同一浓度的盐酸麻黄碱对照品溶液(250.4μg/mL), 分别精密吸取0.5,1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5mL置50mL容量瓶中,加0.01mol/L盐酸稀释置刻度,摇匀,即得不同浓度的对照品溶液｡每一浓度分别进样10μL,按上述色谱条件测定峰面积值,以峰面积(y)为纵坐标,进样量(x)为横坐标进行线性回归,得回归方程为:y=2275512x-3023.43(r=0.9999,n=7)｡表明盐酸麻黄碱在进样量0.02504-0.17528μg范围内与峰面积呈良好的线性关系｡
2.4精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μL,重复进样6次,测得峰面积,计算RSD值为1.14%,表明精密度良好｡2.5 重复性试验取同一水煎液,同法制备6份供试品溶液,分别测得峰面积并计算盐酸麻黄碱含量,结果测得RSD值为0.97%｡
2.6稳定性试验取同一份供试品溶液,分别于0､2､4､6､8､12h进样测定峰面积值, 计算RSD值为1.29%｡表明样品含量在12小时内稳定｡
2.7回收率试验分别制备3个不同浓度的供试品溶液,每个浓度制备3份,共得9份样品,每一样品中加入相同量的对照品,依法测定,结果见表1｡
2.8专属性考察将对照品､供试品溶液､阴性样品溶液,按上述色谱条件下分别进行检测,色谱图如下｡结果在与对照品和样品中盐酸麻黄碱相同的出峰位置无色谱峰,表明处方中其它成分对测定无干扰｡
2.9样品测定按供试品溶液制备方法,制备5个不同批次的乌头汤水煎液的供试品溶液,按2.1所述的色谱条件测试,记录峰面积,测得盐酸麻黄碱含量见表2｡
3讨论
3.1样品处理方法的确定本实验曾采用甲醇为溶剂进行超声提取和水蒸气蒸馏法进行样品处理,但是甲醇超声提取加样回收率太低,水蒸气蒸馏法不容易控制蒸馏液回收量,综合比较以水溶液直接加入稀酸液的方法比较简单易行｡
3.2色谱柱的选择本实验中曾比较过迪马Intertsil ODS-3C18(5μm,250mm×4.6mm),迪马KromasilC18 (5μm,250mm×4.6mm),Agilent HC-C18 (4.6mm×250mm,5μm)几种色普柱,结果以迪马Kromasil C18(5μm,250mm×4.6mm)分离度和峰行较好｡
参考文献
[1]解发良,杨蕴祥,刘翠荣,等.古今名方[M].第2版.郑州:河南科学技术出版社,2004.393
[2]段富津.方剂学[M]. 第1版.上海: 上海科学技术出版社,1995.216
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2005版.一部.北京:化学工业出版社,2005.224
(收稿日期:2008.4.20)
【关键词】:盐酸麻黄碱 高效液相色谱法 乌头汤
【中图分类号】R284.1;R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8517(2008)07-0033-03乌头汤来源于《金匮要略》, 由制川乌､麻黄､黄芪､白芍､炙甘草组成,具有“温经去濕,散寒止痛”之功效,现代医家多以为基本方进行加减,用于类风湿性关节炎､坐骨神经痛､寒凝头痛, 痹证等症的治疗都取得了很好的效果犤1犦｡方中制川乌与麻黄相配, 祛痹止痛之力较著犤2犦,本实验采用HPLC法对乌头汤水煎液中盐酸麻黄碱含量进行了含量测定｡
1仪器与试药
1.1仪器岛津LC-20A型液相色谱仪, SPD-20A型紫外可见检测器;HT-20型柱温箱;TDL-5A型低速自动平衡离心机(湖南星科科学仪器公司)｡
1.2试药盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检验所, 批号:171241-200405); 药材均购自贵阳市同济堂药店(根据2005版《中国药典》一部各品种项下要求进行检测,均为合格品);乙腈为色谱纯(产地:天津市科密欧化学试剂有限公司,批号:20061022);H3PO4为分析纯｡
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱: 迪马Kromasil C18柱(5μm, 250mm×4.6mm); 流动相: 乙腈: 0.1%H3PO4=6: 94; 检测波长: 207nm 犤3犦; 流速:1.0mL/min;柱温:35℃;进样量:10μL｡2.2 对照品溶液､供试品溶液､阴性样品溶液的制备
2.2.1对照品溶液精密称取盐酸麻黄碱对照品6.26mg,置25mL容量瓶中,加0.01mol/L盐酸至刻度,摇匀｡精密量取上述对照品溶液2mL,置50mL容量瓶中,加0.01mol/L盐酸至刻度,配成每1mL含10.0160μg的溶液,摇匀,即得｡
2.2.2供试品溶液按处方量分别称取药材,其中制川乌先煎1h,再与其它四味共煎3次,第1次煎1h,第2､3次各煎0.5h,合并煎液,离心处理10min(3000r/min), 取上清液, 定容置1000mL, 摇匀｡精密吸取定容后的水煎液4mL,置10ml容量瓶中,加0.01mol/L盐酸稀释置刻度,摇匀, 放置过夜, 即得样品溶液｡进样前用0.45μm微孔滤膜滤过｡
2.2.3阴性样品溶液按供试品溶液相同的制备方法制得不含麻黄的阴性样品溶液｡
2.3线性范围的考察取同一浓度的盐酸麻黄碱对照品溶液(250.4μg/mL), 分别精密吸取0.5,1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5mL置50mL容量瓶中,加0.01mol/L盐酸稀释置刻度,摇匀,即得不同浓度的对照品溶液｡每一浓度分别进样10μL,按上述色谱条件测定峰面积值,以峰面积(y)为纵坐标,进样量(x)为横坐标进行线性回归,得回归方程为:y=2275512x-3023.43(r=0.9999,n=7)｡表明盐酸麻黄碱在进样量0.02504-0.17528μg范围内与峰面积呈良好的线性关系｡
2.4精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μL,重复进样6次,测得峰面积,计算RSD值为1.14%,表明精密度良好｡2.5 重复性试验取同一水煎液,同法制备6份供试品溶液,分别测得峰面积并计算盐酸麻黄碱含量,结果测得RSD值为0.97%｡
2.6稳定性试验取同一份供试品溶液,分别于0､2､4､6､8､12h进样测定峰面积值, 计算RSD值为1.29%｡表明样品含量在12小时内稳定｡
2.7回收率试验分别制备3个不同浓度的供试品溶液,每个浓度制备3份,共得9份样品,每一样品中加入相同量的对照品,依法测定,结果见表1｡
2.8专属性考察将对照品､供试品溶液､阴性样品溶液,按上述色谱条件下分别进行检测,色谱图如下｡结果在与对照品和样品中盐酸麻黄碱相同的出峰位置无色谱峰,表明处方中其它成分对测定无干扰｡
2.9样品测定按供试品溶液制备方法,制备5个不同批次的乌头汤水煎液的供试品溶液,按2.1所述的色谱条件测试,记录峰面积,测得盐酸麻黄碱含量见表2｡
3讨论
3.1样品处理方法的确定本实验曾采用甲醇为溶剂进行超声提取和水蒸气蒸馏法进行样品处理,但是甲醇超声提取加样回收率太低,水蒸气蒸馏法不容易控制蒸馏液回收量,综合比较以水溶液直接加入稀酸液的方法比较简单易行｡
3.2色谱柱的选择本实验中曾比较过迪马Intertsil ODS-3C18(5μm,250mm×4.6mm),迪马KromasilC18 (5μm,250mm×4.6mm),Agilent HC-C18 (4.6mm×250mm,5μm)几种色普柱,结果以迪马Kromasil C18(5μm,250mm×4.6mm)分离度和峰行较好｡
参考文献
[1]解发良,杨蕴祥,刘翠荣,等.古今名方[M].第2版.郑州:河南科学技术出版社,2004.393
[2]段富津.方剂学[M]. 第1版.上海: 上海科学技术出版社,1995.216
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2005版.一部.北京:化学工业出版社,2005.224
(收稿日期:2008.4.20)