【摘 要】
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目的 原核表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行分析.方法 通过FCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF2编码382～674位氨基酸序列的基因片段,将扩增产物
【机 构】
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吉林大学畜牧兽医学院,军事医学科学院十一所病毒室,石河子大学动物科技学院,长春中医药大学第一临床附属医院
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目的 原核表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行分析.方法 通过FCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF2编码382～674位氨基酸序列的基因片段,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-293表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot及ELISA鉴定.结果 成功扩增到904 bp的目的 基因.重组载体pET28a-293经双酶切鉴定及序列测定,证实构建正确.SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量与预期相符,表达量可占菌体总蛋白的66.15%.Western blot分析表明目的 蛋白具有较好的反应原性.ELISA试验证实目的 蛋白能与阳性猪源和标准HEV血清发生反应.结论 已成功构建了猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的pET28a-293原核表达载体,并得到了有效表达,为进一步建立猪源戊型肝炎的诊断方法奠定基础.
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