【摘 要】
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目的 研制人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)组织配型基因分型国家参考品.方法 采集45份志愿者的新鲜外周血样本,经EB病毒转化,培养建立永生化细胞系.提取细胞系基因组DNA,分光光度计测定A260/280;细胞系基因组DNA反复冻融3次后,进行琼脂糖凝胶电泳分析;采用HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRB1、HLA-DQB1位点基因高分辨分型试剂盒(测序法)进行全外显子基因分型,并与建系前外周血基因组DNA的分型信息进行比较.将检测结果符合要求的样本组成国
【机 构】
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中国食品药品检定研究院体外诊断试剂检定所非传染病诊断试剂室,北京100050;北京博奥晶典生物技术有限公司,北京101111
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目的 研制人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)组织配型基因分型国家参考品.方法 采集45份志愿者的新鲜外周血样本,经EB病毒转化,培养建立永生化细胞系.提取细胞系基因组DNA,分光光度计测定A260/280;细胞系基因组DNA反复冻融3次后,进行琼脂糖凝胶电泳分析;采用HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRB1、HLA-DQB1位点基因高分辨分型试剂盒(测序法)进行全外显子基因分型,并与建系前外周血基因组DNA的分型信息进行比较.将检测结果符合要求的样本组成国家参考品,采用高分辨基因测序分型法(sequence-based typing,PCR-SBT)进行稳定性和均匀性验证.结果 共获得38株永生化HLA细胞系,基因组DNA的A260/280在1.80～2.15之间;琼脂糖凝胶电泳分析均未见拖带或弥散带,条带完整清晰;分型结果与建系前外周血基因组DNA的分型信息一致.以上述38份基因组DNA样本制备的HLA组织配型基因分型国家参考品,具有良好的均匀性和稳定性.结论 成功建立了HLA组织配型基因分型国家参考品,可用于基因分型类检测试剂盒的质量评价.
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