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摘要 [目的]筛选有效防治木耳害虫的植物源农药。[方法]采用平皿加药法和子实体喷药法，分别研究了印楝素、除虫菊素、鱼藤酮、苦参碱4种植物源农药对木耳菌丝及子实体生长的影响。[结果]在稀释200倍浓度时，4种植物源农药对木耳菌丝抑制作用均较大，且抑制率均随稀释倍数的增大而降低，其中印楝素对木耳菌丝的抑制率最高，苦参碱和除虫菊素其次，鱼藤酮的抑制率相对较低；鱼藤酮对木耳子实体的生长有促进作用。[结论]鱼藤酮可在木耳害虫防治中做进一步研究。
关键词 植物源农药；食用菌；木耳
中图分类号 S482.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08587-02
Abstract [Objective] This research aims to screen out the available botanical pesticides for biological control of Auricularia auricula. [Method] The effects of four botanical pesticides（Azadurachtin， Pyrethrin， Rotenone， Matrine）on the mycelium and fruitbody characteristics of A.auricula were determined by adding pesticides in the cultivate substrate and spraying fruitbody. [Result] When diluted 200 times， four kinds of pesticides on inhibition of mycelium were larger， and all of mycelium inhibition rate with the increase of the dilution ratio became lower. After a detailed analysis， the mycelium inhibition rate of Azadirachtin was the highest， while Rotenone was the lowest； In the spraying fruitbody test， Rotenone was good for the growth of fruitbody of A. auricula. [Conclusion] Rotenone could be further studied on the pests control of A. auricula.
Key words Botanical pesticide； Edible fungi； Auricularia auricula
木耳[Auricularia auricula（L.ex Hook.）Underw.]亦称黑木耳、光木耳等，属担子菌纲木耳目木耳科，是人们最喜爱的食用菌之一，在我国各地均有分布[1]。木耳是一种药食兼用的真菌，其质脆润喉、营养极丰富，其药用价值也越来越得到广泛的研究和认可，其中木耳多糖具有提高免疫[2]、抗肿瘤[3]、抗氧化[4]、抗血栓、保护机体细胞[5]等作用。
近年来随着木耳产业的发展，木耳虫害越来越严重，已成为困扰菇农的一大难题。化学农药是目前采取的主要措施。但是由于食用菌生长周期短、子实体缺乏防护、容易受到污染侵害，大量喷施化学农药易造成菌丝生长缓慢、子实体畸形、害虫产生抗药性、农药残留超标等一系列问题，不仅影响食用菌的产量和质量，而且加速害虫产生抗药性和造成农药残留等问题[6]。植物源农药具有来源于自然、害虫不易产生抗药性、农作物不易产生药害、对环境及非靶标生物安全、作用机理多样等独特优点，特别是能在自然界中快速降解，可有效促进和保证农作物的无公害化生产，越来越受到人们的重视[7]。针对食用菌害虫的无公害防治这一难题，笔者研究了常见的4种植物源农药对食用菌黑木耳菌丝及子实体生长的影响，以期为植物源农药应用于食用菌栽培中害虫防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株。木耳保存于东北林业大学森林保护实验室。
1.1.2 供试植物源农药。
0.3%印楝素乳油、1.5%除虫菊素乳油、2.5%鱼藤酮乳油、2.5%苦参碱水剂均购自福建厦门多多生物农药有限公司。
1.1.3 栽培料。栽培料配方：78%硬杂木屑、20%麸皮、1%豆粉、0.5%石膏及0.5%石灰粉，含水率为65%左右。
1.2 方法
1.2.1 木耳菌种的活化。
将保存在冰箱里的木耳菌种用PDA培养基活化。将木耳菌种接在PDA平板培养基中心位置，每皿只接1个点，接10个皿，用封口膜封上，置于（24±1）℃恒温箱避光培养，定期观察、记录。7～9 d菌丝即可长满整个培养皿，备用。
1.2.2 含有植物源农药的培养基配制。
将4种植物源农药分别0.22 μm滤膜过滤，用移液枪分别吸取500.0、250.0、125.0、62.5 μl的农药原液，加入100 ml PDA培养基中，即稀释200、400、800、1 600倍，以蒸馏水作对照，充分混匀，摇匀后倒入无菌培养皿，每皿约15 ml，静置冷却。
1.2.3 植物源农药对木耳菌丝生长的影响。
选取生长均一、正圆形的木耳菌落，用直径1 cm打孔器沿菌落边缘打成菌饼，用接种钩挑取菌饼接入含药 PDA培养基中央，每个浓度4次重复，设对照。加盖后以封口膜封口，并倒置于（24±1）℃恒温培养箱中培养，每24 h观察菌丝生长情况，待有1组菌丝生长至培养皿边缘时终止培养，采用游标卡尺测量并记录各个药剂浓度培养基中菌落直径。 1.2.4 植物源农药对木耳子实体生长的影响。
当木耳出现子实体原基时，将供试农药对水稀释800倍均匀喷雾，至子实体表面有水珠滴下为止。每个处理3次重复，每个重复10袋料（每袋料约1 kg）。施药后，每24 h对木耳子实体颜色、形状等进行观察、记录。
1.3 数据处理
采用Microsoft Excel 2003软件对试验数据进行处理，采用SPSS软件对数据进行差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 植物源农药对木耳菌丝生长的影响
经过9 d的恒温培养，对照组最先长满平板（图1），与对照组相比，添加4种植物源农药的培养基，木耳菌丝的生长均受到不同程度的抑制，其中印楝素稀释200倍和400倍时，菌丝均未萌发；添加苦参碱和除虫菊素所生长的木耳菌丝，其形态和颜色发生改变，前者的菌丝过于稀疏和暗淡，后者的菌丝过于致密和白亮；鱼藤酮稀释800倍和1 600倍时，菌丝生长与对照组最相似。4种植物源农药不同浓度下菌丝纯生长量和菌丝生长速率与对照组相比均有显著差异（表1），抑制率以鱼藤酮稀释1 600倍的最低（24.71%）。
2.2 植物源农药对木耳子实体生长的影响
由表2可知，不同种植物源农药对木耳的形状和各孔出耳差异几乎无影响，除虫菊素的农艺性状均不如对照，鱼藤酮在干耳片长、厚和单朵均干重上均优于对照组，具有较好的增产效果。
3 讨论
试验采用平皿加药法和子实体喷药法分别考察了4种植物源农药不同浓度对木耳菌丝及子实体生长的影响，为4种药剂在木耳害虫防治上的应用提供了参考。在平皿加药法试验中，4种植物源农药的4个浓度对木耳菌丝的生长与对照组相比均有显著抑制，说明在今后的木耳害虫防治中，母种不适宜加药培养，但4种植物源农药中，鱼藤酮对木耳菌丝生长的抑制作用最小，菌丝生长状态最接近对照组，且在子实体喷药试验中，鱼藤酮对子实体生长起到一定的促进作用。已有研究表明，鱼藤酮具有触杀、胃毒、拒食和熏蒸作用，杀虫谱广，对果树、蔬菜、茶叶、花卉及粮食作物上的数百种害虫有良好的防治效果[8]，今后应更加深入研究鱼藤酮对食用菌害虫的防治效果。
参考文献
[1] 图力古尔，李玉.我国侧耳属真菌的种类资源及其生态地理分布[J].中国食用菌，2001，20（5）：8-10.
[2] 许晓燕，余梦瑶，罗霞，等.黄背木耳多糖对巨噬细胞的激活作用[J].中国食用菌，2008，28（3）：41-42，49.
[3] SONG G L，DU Q Z.Isolation of a polysaccharide with anticancer activity from Auricularia polytricha using highspeed countercurrent chromatography with an aqueous twophase system[J].Journal of Chromatography，2010，1217：5930-5934.
[4] 周学君，俞发.毛木耳多糖的抗氧化作用[J].中国医院药学杂志，2000，20（10）：610-611.
[5] 吴春敏，陈琼华.毛木耳多糖抗凝血和降血脂作用[J].中国药科大学学报，1991，22（3）：164-166.
[6] 孙丽娟.食用菌害虫种类调查及防治技术研究[D].杨凌：西北农林科技大学，2008.
[7] 康文斌.食用菌栽培料农药残留情况调查及对子实体安全生产的影响研究[D].福州：福建农林大学，2011.
[8] 谷文祥，曾鑫年，谢建军.不同温度对毛鱼藤和西非灰毛豆愈伤组织生长的影响[J].华南农业大学学报，1999，20（4）：125-126.
关键词 植物源农药；食用菌；木耳
中图分类号 S482.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08587-02
Abstract [Objective] This research aims to screen out the available botanical pesticides for biological control of Auricularia auricula. [Method] The effects of four botanical pesticides（Azadurachtin， Pyrethrin， Rotenone， Matrine）on the mycelium and fruitbody characteristics of A.auricula were determined by adding pesticides in the cultivate substrate and spraying fruitbody. [Result] When diluted 200 times， four kinds of pesticides on inhibition of mycelium were larger， and all of mycelium inhibition rate with the increase of the dilution ratio became lower. After a detailed analysis， the mycelium inhibition rate of Azadirachtin was the highest， while Rotenone was the lowest； In the spraying fruitbody test， Rotenone was good for the growth of fruitbody of A. auricula. [Conclusion] Rotenone could be further studied on the pests control of A. auricula.
Key words Botanical pesticide； Edible fungi； Auricularia auricula
木耳[Auricularia auricula（L.ex Hook.）Underw.]亦称黑木耳、光木耳等，属担子菌纲木耳目木耳科，是人们最喜爱的食用菌之一，在我国各地均有分布[1]。木耳是一种药食兼用的真菌，其质脆润喉、营养极丰富，其药用价值也越来越得到广泛的研究和认可，其中木耳多糖具有提高免疫[2]、抗肿瘤[3]、抗氧化[4]、抗血栓、保护机体细胞[5]等作用。
近年来随着木耳产业的发展，木耳虫害越来越严重，已成为困扰菇农的一大难题。化学农药是目前采取的主要措施。但是由于食用菌生长周期短、子实体缺乏防护、容易受到污染侵害，大量喷施化学农药易造成菌丝生长缓慢、子实体畸形、害虫产生抗药性、农药残留超标等一系列问题，不仅影响食用菌的产量和质量，而且加速害虫产生抗药性和造成农药残留等问题[6]。植物源农药具有来源于自然、害虫不易产生抗药性、农作物不易产生药害、对环境及非靶标生物安全、作用机理多样等独特优点，特别是能在自然界中快速降解，可有效促进和保证农作物的无公害化生产，越来越受到人们的重视[7]。针对食用菌害虫的无公害防治这一难题，笔者研究了常见的4种植物源农药对食用菌黑木耳菌丝及子实体生长的影响，以期为植物源农药应用于食用菌栽培中害虫防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株。木耳保存于东北林业大学森林保护实验室。
1.1.2 供试植物源农药。
0.3%印楝素乳油、1.5%除虫菊素乳油、2.5%鱼藤酮乳油、2.5%苦参碱水剂均购自福建厦门多多生物农药有限公司。
1.1.3 栽培料。栽培料配方：78%硬杂木屑、20%麸皮、1%豆粉、0.5%石膏及0.5%石灰粉，含水率为65%左右。
1.2 方法
1.2.1 木耳菌种的活化。
将保存在冰箱里的木耳菌种用PDA培养基活化。将木耳菌种接在PDA平板培养基中心位置，每皿只接1个点，接10个皿，用封口膜封上，置于（24±1）℃恒温箱避光培养，定期观察、记录。7～9 d菌丝即可长满整个培养皿，备用。
1.2.2 含有植物源农药的培养基配制。
将4种植物源农药分别0.22 μm滤膜过滤，用移液枪分别吸取500.0、250.0、125.0、62.5 μl的农药原液，加入100 ml PDA培养基中，即稀释200、400、800、1 600倍，以蒸馏水作对照，充分混匀，摇匀后倒入无菌培养皿，每皿约15 ml，静置冷却。
1.2.3 植物源农药对木耳菌丝生长的影响。
选取生长均一、正圆形的木耳菌落，用直径1 cm打孔器沿菌落边缘打成菌饼，用接种钩挑取菌饼接入含药 PDA培养基中央，每个浓度4次重复，设对照。加盖后以封口膜封口，并倒置于（24±1）℃恒温培养箱中培养，每24 h观察菌丝生长情况，待有1组菌丝生长至培养皿边缘时终止培养，采用游标卡尺测量并记录各个药剂浓度培养基中菌落直径。 1.2.4 植物源农药对木耳子实体生长的影响。
当木耳出现子实体原基时，将供试农药对水稀释800倍均匀喷雾，至子实体表面有水珠滴下为止。每个处理3次重复，每个重复10袋料（每袋料约1 kg）。施药后，每24 h对木耳子实体颜色、形状等进行观察、记录。
1.3 数据处理
采用Microsoft Excel 2003软件对试验数据进行处理，采用SPSS软件对数据进行差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 植物源农药对木耳菌丝生长的影响
经过9 d的恒温培养，对照组最先长满平板（图1），与对照组相比，添加4种植物源农药的培养基，木耳菌丝的生长均受到不同程度的抑制，其中印楝素稀释200倍和400倍时，菌丝均未萌发；添加苦参碱和除虫菊素所生长的木耳菌丝，其形态和颜色发生改变，前者的菌丝过于稀疏和暗淡，后者的菌丝过于致密和白亮；鱼藤酮稀释800倍和1 600倍时，菌丝生长与对照组最相似。4种植物源农药不同浓度下菌丝纯生长量和菌丝生长速率与对照组相比均有显著差异（表1），抑制率以鱼藤酮稀释1 600倍的最低（24.71%）。
2.2 植物源农药对木耳子实体生长的影响
由表2可知，不同种植物源农药对木耳的形状和各孔出耳差异几乎无影响，除虫菊素的农艺性状均不如对照，鱼藤酮在干耳片长、厚和单朵均干重上均优于对照组，具有较好的增产效果。
3 讨论
试验采用平皿加药法和子实体喷药法分别考察了4种植物源农药不同浓度对木耳菌丝及子实体生长的影响，为4种药剂在木耳害虫防治上的应用提供了参考。在平皿加药法试验中，4种植物源农药的4个浓度对木耳菌丝的生长与对照组相比均有显著抑制，说明在今后的木耳害虫防治中，母种不适宜加药培养，但4种植物源农药中，鱼藤酮对木耳菌丝生长的抑制作用最小，菌丝生长状态最接近对照组，且在子实体喷药试验中，鱼藤酮对子实体生长起到一定的促进作用。已有研究表明，鱼藤酮具有触杀、胃毒、拒食和熏蒸作用，杀虫谱广，对果树、蔬菜、茶叶、花卉及粮食作物上的数百种害虫有良好的防治效果[8]，今后应更加深入研究鱼藤酮对食用菌害虫的防治效果。
参考文献
[1] 图力古尔，李玉.我国侧耳属真菌的种类资源及其生态地理分布[J].中国食用菌，2001，20（5）：8-10.
[2] 许晓燕，余梦瑶，罗霞，等.黄背木耳多糖对巨噬细胞的激活作用[J].中国食用菌，2008，28（3）：41-42，49.
[3] SONG G L，DU Q Z.Isolation of a polysaccharide with anticancer activity from Auricularia polytricha using highspeed countercurrent chromatography with an aqueous twophase system[J].Journal of Chromatography，2010，1217：5930-5934.
[4] 周学君，俞发.毛木耳多糖的抗氧化作用[J].中国医院药学杂志，2000，20（10）：610-611.
[5] 吴春敏，陈琼华.毛木耳多糖抗凝血和降血脂作用[J].中国药科大学学报，1991，22（3）：164-166.
[6] 孙丽娟.食用菌害虫种类调查及防治技术研究[D].杨凌：西北农林科技大学，2008.
[7] 康文斌.食用菌栽培料农药残留情况调查及对子实体安全生产的影响研究[D].福州：福建农林大学，2011.
[8] 谷文祥，曾鑫年，谢建军.不同温度对毛鱼藤和西非灰毛豆愈伤组织生长的影响[J].华南农业大学学报，1999，20（4）：125-126.