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目的
建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑中巨细胞病毒(CMV)DNA的实验方法,并评价方法的最低检测限、精密度、特异性和临床应用能力。
方法确立CMV-gB段的引物和探针,构建标准质粒,检测CMV毒株的浓度。荧光定量PCR法检测10倍梯度稀释的病毒株干血斑,获得方法的最低检测限和批内、批间精密度。2011年9月至2013年2月收集复旦大学附属儿科医院10份确诊先天性CMV感染以及120份普通人群中出生3 d内的新生儿干血斑标本,以本方法进行验证。
结果CMV DNA的最低检测限为4.44×103拷贝/ml;检测灵敏度为2.66 拷贝/25 μl反应体系。CMV毒株浓度为4.44×106拷贝/ml时检测CMV DNA的批内、批间精密度分别为0.74%和1.39%;CMV毒株浓度为4.44×104拷贝/ml时批内、批间精密度分别为1.04%和1.84%。10份确诊先天性CMV感染的标本中,8份CMV DNA阳性;120份新生儿标本中,2份CMV DNA阳性。阳性标本经套式PCR复测以及测序验证均为CMV阳性。
结论成功建立了一种可用干血斑中微量CMV检测的荧光定量PCR法,该方法快速、灵敏、精密度高,适用于大规模新生儿先天性CMV感染的筛查。(中华检验医学杂志,2014,37:261-265)