大豆查尔酮还原酶GmCHR基因的克隆及其在烟草中的表达?

来源 :吉林农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haisen888
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以大豆品种“吉农28”为材料,利用RT-PCR技术获得GmCHR基因序列,并选择其中918 bp的开放阅读框,以pBI121为基础载体,构建了由35S启动子驱动的GmCHR植物表达载体,转入烟草中并对17株抗卡那霉素的转基因烟草进行PCR、GUS染色、Southern杂交检测,对植株中GmCHR基因mRNA表达量进行荧光定量PCR检测,采用高效液相色谱技术测定转基因植株中查尔酮还原酶催化产物异甘草素的含量。结果表明:GmCHR基因成功整合到烟草基因组中并能够成功表达;在转基因植株中目的基因的mRNA均有表达,且不同植株间表达量存在差异;转化烟草叶部组织中异甘草素的平均含量为(7?528±0?018)μmol/g,而转空载体烟草中未检测出异甘草素。“,”GmCHR gene sequence was isolated from soybean variety“jinong 28” by RT-PCR tech?nique. The 918 bp open reading frame was selected in that sequence. On the basis of pBI121 carri?er, a GmCHR recombinant botany expression vector driven by 35S promoter was constructed and transferred into tobacco. Seventeen plants of kan resistant transgenic tobacco were identified by mo?lecular biology method of PCR and Southern blotting. Tested positive transgenic tobacco was per?formed with GUS activity assay. Expression value of the gene in different plants was determined by real?time fluorescent quantitative PCR and the content of isoliquiritigenin catalyticed product by the enzyme was identified by HPLC technology. The results indicated that GmCHR gene had been inte?grated into the tobacco genome and expressed successfully. The expression value of the gene in the leaves of different transgenic plants was significantly different. Average content of isoliquiritigenin catalyzed by enzyme in tobacco leaf tissue was (7?528±0?018)μmol/g, but isoliquiritigenin was not detected in empty vehicle transfected tobacco.
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