目的建立同时测定血浆异烟肼(INH)、乙酰异烟肼(Ac INH)、利福平(RFP)、吡嗪酰胺(PZA)的高效液相色谱法(HPLC),并验证其在肺结核患者中的应用效果。方法 HPLC色谱柱为Waters Xselect-HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈和磷酸二氢钾为流动相,柱温40℃,流速0.8~1.0 m L/min,进样体积20μL。同时进样含INH、Ac INH、RFP、PZA对照品的血浆,检验方法的专属性、线性关系、精密度和准确度、稳定性及回收率。取联合服用INH、乙胺丁醇、RFP和PZA的10例肺结核患者的血浆样本,采用上述HPLC测定INH、Ac INH、RFP和PZA的血药浓度。结果血浆样本中INH、Ac INH、RFP和PZA各组分有较好的分离,互不干扰;在线性范围内与峰面积线性关系良好(r2>0.99);日内、日间精密度均<10%;稳定性较好;回收率为80%~120%。肺结核患者中除1例Ac INH和1例RFP血药浓度低于线性范围外,其余数据均在线性范围内。结论成功建立了同时测定血浆INH、Ac INH、RFP、PZA的HPLC方法,该方法专属性好,样品处理简单,符合生物样品分析要求。