抑制凋亡相关基因PNAS-2表达后U937细胞凋亡率的改变

来源 :诊断学理论与实践 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangjiao610329
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目的:构建并鉴定凋亡相关基因——PNAS-2的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体,将其转染U937细胞,筛选后检测细胞凋亡的变化。方法:shRNA质粒载体pRNATU6.1/NEO经限制性内切酶BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,连接带有BamH Ⅰ及HindⅢ黏性末端的shRNA插入片段,转化感受态细菌,并行测序鉴定。将阳性shRNA质粒载体进行细胞转染,合并使用G418及流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,应用半定量PCR鉴定shRNA封闭效果;用AnnexinV—APC/7-AAD标记后,使用
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