论文部分内容阅读
目的探讨葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,Grp78)对人舌癌细胞系Tca-8113侵袭的影响及其分子机制。方法应用pc DNA3.1(+)-Grp78重组质粒转染舌癌细胞系Tca-8113筛选得到稳定表达Grp78的克隆(78C6),再应用si RNAGrp78转染78C6敲除Grp78表达,应用Transwell实验分析其侵袭能力,免疫荧光和细胞伸展实验检测细胞骨架排列和细胞伸展情况,GST-pulldown技术对Rac1和Rho A活性进行分析,Western blot检测Rac1、Rho A、MMP-9和MMP-2的表达。结果 Transwell实验结果显示,特异性上调Grp78表达明显促进舌癌细胞的侵袭,并且这种促进作用可以被si RNA-Grp78转染抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步的研究发现,与对照组相比,Grp78高表达可以促进舌癌细胞Tca-8113的伸展和极性形成,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞骨架染色结果表明特异性上调Grp78后,细胞骨架微丝主要分布于细胞边缘,而这种作用可以被si RNA-Grp78转染抑制,导致细胞皮质部位出现明显的应力纤维。GST-pulldown结果表明,与对照组相比,Grp78高表达使Rac1的活性水平增高,Rho A活性降低,而si RNA-Grp78转染的细胞中Rac1活性降低,Rho A活性升高。Western blot研究显示,与对照组相比,Tca-8113/Grp78细胞中MMP-2和MMP-9表达增高(P<0.05),si RNA-Grp78转染的细胞中MMP-2和MMP-9表达降低(P<0.05),而Rho A和Rac1的表达前后无变化。结论 Grp78通过激活Rac1抑制Rho A活性及上调MMP-2和MMP-9表达来促进舌癌Tca-8113细胞的侵袭。